人溶菌酶转基因克隆牛外源基因整合位点分析

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近十年来,转基因技术与体细胞克隆技术的结合使转基因动物的生产有了突飞猛进的发展。转基因克隆动物是在获得转基因细胞系的基础上进行体细胞核移植,生产具有特定性状、特殊功能或者一定目的的克隆动物群。转基因克隆动物在生产人类重要的医药蛋白、培育抗病品系、异种器官移植以及基因治疗等方面都显示出了广阔的应用前景。   确定外源基因的整合位点是得到转基因克隆动物后的重要任务。本实验克隆了人溶菌酶转基因克隆牛中外源基因的整合位点,并对整合位点的特征进行了分析。所得结果如下:   1.应用TAIL-PCR和旁侧PCR相结合,得到了2头转基因克隆牛外源基因的完整的整合位点,及1头转基因克隆牛的部分3侧翼序列。   2.个体0503中外源基因整合在牛的12号染色体的基因组克隆(NW_003104315.1)中。外源基因整合造成染色体57bp的核苷酸缺失,外源基因3端有3875bp核苷酸的缺失,5端有314bp的核苷酸缺失。外源基因的3味端与染色体之间插入了一段290bp的未知片段,5整合处的末端与拓扑异构酶Ⅰ作用位点的共有序列相连。   3.个体福洋中外源基因整合在牛的19号染色体的基因组克隆(NW_003104497.1)中。外源基因的整合造成染色体94bp的核苷酸缺失,外源基因3端同样存在3875bp的核苷酸缺失,5端有间隔的104bp的核苷酸缺失。外源基因的3末端与染色体之间插入了一段260bp的未知片段,该未知片段与个体0503中的未知片段有227bp完全一致,5整合处的末端与拓扑异构酶Ⅰ作用位点的共有序列相连。   4.应用3味端的验证引物组合对个体1261进行尝试性扩增,得到其3末端的部分侧翼序列。分析可知,个体1261中,外源基因3末端的缺失与个体0503和福洋一致,紧邻外源基因的同样是227bp的未知片段,此片段个体0503和福洋中所获得片段完全相同。由于没有得到相关染色体的信息,因此没能确定1261中外源基因在牛基因组中的位置。  
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