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目的:研究表明TNFR/RIPK信号通路在脊髓损伤(Spinal Cord Injury,SCI)后表达上调,该通路可能在脊髓损伤后神经功能恢复过程中发挥重要作用。本课题通过制造大鼠急性SCI模型,利用RIPK1特异性抑制剂Necrostatin-1(Nec-1)对SCI的大鼠进行干预,观察凋亡相关蛋白的表达情况并评价大鼠运动、感觉功能恢复情况,探讨抑制TNFR/RIPK信号通路对神经细胞凋亡的影响。方法:选用健康清洁SD大鼠120只,雄性,体重0.25-0.30 kg。随机将动物分为假手术组(只掀开椎板,I组,Sham组,n=30)、假手术+Nec-1组(II组,Sham+Nec-1组,n=30)、SCI+二甲基亚砜(DMSO)(脊髓损伤后给予安慰剂DMSO,III组,DMSO组,n=30)、SCI+Nec-1(Ⅳ组,Nec-1组,n=30)。各组又分为伤后6h、12h、24h、3d和7d五个亚组,每亚组有6只大鼠。采用脊髓钳夹法制作大鼠急性脊髓损伤模型,并在硬膜下放置PE-0402导管以便局部给药。将Nec-1配成浓度25μg/μl的溶液;假手术组(I组)不作任何处理,II组和Ⅳ组在损伤后30分钟使用微量注射器经导管注射1ul Nec-1,III组相同时间点注射等量的DMSO溶液。术后3天使用青霉素,4万单位/日;必要时补液。术后每日膀胱按摩2次助其排尿,至其排尿反射恢复为止。在造模前及造模后6 h、12 h、24 h、3 d和7 d对每组大鼠Basso/Beattie/Bresnahan(BBB)评分,评价功能恢复情况;造模后各组按预定时间点随机处死6只大鼠,取出脊髓标本进行苏木素-伊红(HE)染色、尼氏(Nissl)染色观察神经组织病理变化;SCI后24h取材行碘化丙啶(propidine iodide,PI)染色、Tunel法检测细胞凋亡情况,Western Blot检测Bcl-2,RIPK1及RIPK3蛋白的表达水平。所得数据用SPSS19.0统计软件进行分析。结果:脊髓损伤后6小时内,大鼠后肢完全瘫痪,DMSO组从术后24 h开始恢复,而Nec-1组后肢运动功能从术后12小时开始恢复,24 h后Nec-1组BBB评分均明显高于DMSO组(P<0.05)。在造模后7天内,Sham和Sham+Nec-1组中的HE和Nissl染色显示,脊髓组织结构完整,神经细胞形态正常。术后各时间点Nec-1组中脊髓组织损伤程度和存活神经元数量均优于DMSO组,24 h时差异最明显,差异有统计学意义(P<0.05)。PI染色表明DMSO组SCI区域结构严重破坏,大量细胞碎裂崩解,PI红染细胞明显增多,Nec-1干预后PI红染细胞较DMSO组明显减少,神经元崩解减轻(P<0.05)。SCI后24 h时,在DMSO组中,凋亡小体数量明显增多,Nec-1干预后凋亡小体数量较DMSO组明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。Bcl-2蛋白的表达在Sham组和Sham+Nec-1组中表达稳定,在脊髓损伤组给予Nec-1干预后,表达上调。凋亡蛋白RIPK1和RIPK3的表达水平在Sham组相当低,在SCI后高表达,给予Nec-1后,表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)TNFR/RIPK信号通路介导的坏死性凋亡参与早期脊髓损伤后神经元程序性细胞死亡。(2)给予RIPK1的特异性抑制剂Nec-1,可明显促进大鼠运动功能恢复,降低脊髓组织损伤程度,增加神经元存活数量,使相关凋亡蛋白RIPK1和RIPK3的表达下调,促进神经功能恢复。(3)TNFR/RIPK信号通路在急性SCI后坏死性凋亡过程中发挥重要作用,为急性SCI的防治提供了新的策略。