猪支原体肺炎（Mycoplasma pneumoniae of swine，MPS）又称猪地方流行性肺炎（Enzootic pneumoniae of Swine，EPS），是由猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp）引起的一种慢性接触性呼吸道传染病，主要症状为咳嗽和气喘。其特征为高发病率，低死亡率，患猪生长缓慢，饲料转化率低，广泛分布于世界各地。该病原体常与巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌等混合感染。利用其特异性蛋白建立诊断方法是目前研究的热点。在血清学检测方法中，ELISA方法具有方便、快速、敏感性和特异性高等特点，在动物疾病的检测中得到了广泛的应用。另外，猪肺炎支原体核苷酸还原酶基因的克隆为基因工程疫苗研究奠定了基础，对于本病的控制有重要的现实意义。为此，本研究开展了以下两方面的工作。 1．猪肺炎支原体ELISA抗体检测方法的建立和应用 近年来研究发现乳酸脱氢酶基因LDH是猪肺炎支原体的种属特异性基因。根据Genbank中猪肺炎支原体乳酸脱氢酶基因（LDH）基因序列设计一对引物，PCR扩增LDH基因，首先将扩增片段连接到pMD18-T上，然后连接到表达载体pGEX-KG上进行序列测定，经测序正确后诱导表达。目的蛋白在大肠杆菌中的表达产物以可溶性蛋白和包涵体二种形式存在，大小与预期相符。将超声波破碎的诱导菌液高速离心后其上清用Glutathione Sepharose 4B bead亲和层析纯化。用猪肺炎支原体的标准阳性血清对纯化蛋白作Western-blot检测，出现目的条带。以纯化蛋白为抗原建立了检测猪肺炎支原体抗体的间接ELISA方法，该方法具有较好的稳定性和重复性，较高的特异性与敏感性。用建立的ELISA方法与中国兽医药品监察所研制的IHA试剂盒同时检测120份临床血清，二者总符合率为92.5％。用建立的ELISA方法检测了671份临床送检不同年龄阶段的猪血清，结果显示断奶前仔猪Mhp感染率为44.3％，保育猪为3.0％，育肥猪为17.44％，种猪为73.41％，这初步反映了猪喘气病在各个年龄阶段的感染率。本研究建立的LDH—ELISA为猪支原体肺炎抗体检测和流行病学调查提供了有用的技术手段。 2．猪肺炎支原体核苷酸还原酶（nrdF）基因的克隆 猪肺炎支原体核苷酸还原酶基因R₂亚基C末端具有良好的免疫原性，其抗血清可以抑制猪肺炎支原体的生长。本研究根据Peter K等（1996）文章中的nrdF基因R₂亚基C末端的822bp核苷酸片段设计了一对引物，PCR扩增了该片段，首先将其连接到克隆载体pMD18-T上，然后连接到表达载体pGEX-KG上进行序列测定。测序结果与Peter K（1996）文章中报道的序列用BLAST软件分析，结果显示二者同源性为99％。