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目的：检测肝细胞癌患者外周血AFP158-166特异性T细胞比例,并利用健康志愿者外周血淋巴细胞,体外诱导AFP158-166特异性T细胞,为肝癌的免疫治疗奠定基础。方法：1、采用FITC荧光标记的HLA-A2抗体及HLA-A2基因分型高分辨检测试剂盒(PCR-SSP),筛选HLA-A0201患者。取外周血,密度梯度离心法分离获取外周血单个核细胞(PBMC),流式细胞技术检测T细胞亚群；通过R-PE标记的MHC-AFP158-166肽五聚体,流式细胞技术检测患者外周血中AFP158-166特异性T细胞的比例。2、筛选HLA-A0201的健康志愿者,分离PBMC,按如下两种方法分别刺激特异性T细胞增殖。(1)培养T2杂交瘤细胞,负载HLA-A0201抗原表位肽AFP158-166,γ射线照射(75Gy)处理,与PBMC1:1混合,反复刺激,IL-2维持。(2)以含人GM-CSF、IL-4及TNF-α细胞因子的培养基培养PMBC,贴壁粘附培养法培养收获树突状细胞(DC),将DC负载HLA-A0201表位肽AFP158-166,与新鲜淋巴细胞以1：10比例混合,含细胞因子IL-2培养液培养。待出现细胞大量增殖后收获细胞,MHC-AFP158-166肽五聚体检测AFP158-166特异性T细胞,细胞毒性实验检测其对靶细胞的特异性杀伤能力。结果：(1)28例肝细胞肝癌患者中,筛选出基因型HLA-A0201阳性者18例,2ml外周血可分离PBMC约1x107个,未能检测出CD8+五聚体+T细胞。(2)T2细胞与AFP158-166共同孵育,细胞表面HLA-A2分子表达增加,随着肽浓度增加,HLA-A2平均荧光强度及表达率逐渐增加,在抗原肽浓度为45μg/ml与60μg/ml时达到最大结合效力,90μg/ml时HLA-A2分子的表达下降。10例健康志愿者,基因型HLA-A0201阳性者3例,每20ml外周血培养的细胞中可收获DC细胞(1.94±0.79)×106个,培养至第7天检测表面抗原： CD83、CD80、CD86和HLA-DR阳性率分别为(62.6±4.2)%、(90.4±2.4)%、(98.2±0.3)%和(87.9±4.2)%。(3)DC负载AFP158-166与淋巴细胞混合培养14d左右出现大量细胞增殖,流式检测CD8+MHC-AFP158-166五聚体+细胞7.5%,与负载AFP158-166的T2细胞混合培养的淋巴细胞中,未检测到CD8+MHC-AFP158-166五聚体+细胞。(3)细胞毒性实验显示,DC激活的淋巴细胞对AFP+肝癌细胞HepG2和负载AFP的T2细胞的杀伤率显著高于对未负载AFP的T2细胞和负载Her2抗原肽的T2细胞的杀伤率,差异具有统计学意义(p<0.05)(效靶比20：1时分别为45.12±10.60%和39.06±±6.48%vs14.83±9.82%和2.51±0.14%)；T2激活的淋巴细胞依效靶比20：1对上述细胞杀伤率分别为：HepG2(14.03±11.17)%,负载AFP的T2(8.49±±7.34)%,T2(3.26±0.32)%,负载Her2的T2(3.36±2.45)%,与DC激活的淋巴细胞对HepG2、负载AFP的T2细胞的杀伤作用比较,差异具有统计学意义(p<0.05)。结论：MHC-肽五聚体检测未能从AFP+肝癌患者外周血中检出AFP158-166特异性T淋巴细胞,提示患者免疫系统对AFP产生耐受或无能。DC负载抗原肽AFP158-166可体外刺激健康志愿者外周血PBMC,获得AFP158-166特异性T淋巴细胞,可特异性杀伤AFP+肝癌细胞。本研究结果为肝癌的过继细胞免疫治疗研究提供了实验基础。