【摘 要】
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胚胎原始生殖细胞(Embryonic Primordial Germ Cells,EPGCs)是生殖母细胞的前体细胞,是精子或卵子的祖先细胞,在多能干细胞研究领域中已成为一个新的干细胞资源,亦是近年来干
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胚胎原始生殖细胞(Embryonic Primordial Germ Cells,EPGCs)是生殖母细胞的前体细胞,是精子或卵子的祖先细胞,在多能干细胞研究领域中已成为一个新的干细胞资源,亦是近年来干细胞研究的又一个热点。基于目前国内外对鸡胚胎原始生殖细胞(EPGCs)正处于起步的研究现状,本研究对这一胚胎生殖系干细胞进行了系统的探索性研究。在鸡胚发育的第14期血液中、第19期和第28期的生殖腺中采用不同的分离提取方法分别获取EPGCs,并进行体外培养,以探讨分离培养EPGCs的适宜时期和方法;系统地探索了EPGCs的体外培养体系、传代方法和条件、不同冷冻体系对鸡EPGCs冷冻保存的效果以及外源性细胞因子mLIF、hSCF、bFGF和hIL-11对体外培养的鸡EPGCs增殖和分化的影响,以期筛选出鸡EPGCs合适的体外培养体系和冷冻保存条件;同时利用不同特异性化学物质定向诱导EPGCs向脂肪细胞、神经元样细胞分化,以及尝试对EPGCs单细胞进行体外培养克隆传代、检测其形态特征、表面标记及体外分化等特征特性,为建立EPGCs干细胞系以及体外研究胚胎发育、基因组学研究、药物筛选等提供有价值的参考依据。研究结果主要归纳为以下几个方面:1.采用Ficoll密度梯度离心法+酶解法、单独EDTA-酶解法两种方法,分别提取第14期血液(孵化53小时)、第19期(孵化72小时)和第28期(孵化132小时)生殖腺中的鸡EPGCs,比较在相同的体外培养条件下两种分离方法获取三个发育时期的鸡EPGCs数量、存活率和存活时间的差异。结果表明:单独EDTA-酶解法
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