随着“温室效应”的加剧及集约化养殖的发展,热应激造成的肉鸡氧化应激,已成为肉鸡养殖业面临的重要问题,制约了该行业的健康高速发展。转录因子E2相关因子2(Nrf2)是众多抗氧化酶的上游调控基因,本课题组前期研究表明,饲粮添加白藜芦醇(Resveratrol,Res)可显著提高热应激肉鸡肌肉抗氧化酶活力,改善肌肉品质,但相关分子机制是否与Nrf2信号通路有关仍需进一步研究。本研究的目的在于探究白藜芦醇对肉鸡骨骼肌细胞热应激损伤的保护作用并阐明其作用机制,首先从肉鸡鸡胚中分离纯化原代肉鸡成肌细胞,并优化其培养条件,通过荧光定量法及免疫荧光法进行细胞鉴定,并利用含2%马血清的培养基诱导其成肌分化为骨骼肌细胞。以细胞活力、细胞抗氧化功能及Nrf2信号通路相关基因表达丰度等指标建立肉鸡骨骼肌细胞热应激模型并确定白藜芦醇最适添加浓度。随后分别采用白藜芦醇、叔丁基对苯二酚(t-BHQ,Nrf2的特异性激活剂)或ML385(Nrf2的特异性抑制剂)和白藜芦醇预处理肉鸡骨骼肌细胞,比较白藜芦醇,Nrf2信号通路的激活以及白藜芦醇在抑制Nrf2后对热应激条件下细胞活力、细胞抗氧化功能及Nrf2信号通路相关基因及蛋白表达丰度的影响。结果显示,本试验成功分离得到肉鸡成肌细胞,发现其在39.5℃培养条件下具有更好的增殖能力,成肌诱导分化后可形成骨骼肌细胞。与39.5℃组相比,肉鸡骨骼肌细胞在44.5℃热处理1 h后,细胞活力及抗氧化功能显著降低(P<0.05),差异水平较其他温度热处理组更大,故以44.5℃处理细胞1 h构建肉鸡骨骼肌细胞热应激模型。25μmol/L白藜芦醇预处理肉鸡骨骼肌细胞在不显著影响其细胞活力的情况下(P>0.05),显著提高细胞抗氧化功能及Nrf2信号通路相关部分基因m RNA的表达(P<0.05),故本试验白藜芦醇的预处理浓度设定为25μmol/L。与适温培养组相比,热应激处理造成肉鸡骨骼肌细胞活力,T-AOC、T-SOD、CAT活力,Nrf2、HO-1及CAT基因的m RNA表达丰度,Nrf2核蛋白及总蛋白、HO-1总蛋白及NQO1总蛋白的表达显著降低(P<0.05),PC、MDA、ROS含量显著升高(P<0.05);与热应激组相比,白藜芦醇+热应激组细胞活力,T-AOC、CAT活力,HO-1、NQO1、SOD1、SOD2及CAT基因的m RNA表达丰度,Nrf2核蛋白及总蛋白、HO-1总蛋白及NQO1总蛋白的表达显著升高(P<0.05),PC、MDA、ROS含量显著降低(P<0.05);激活Nrf2显著提高热应激条件下肉鸡骨骼肌细胞活力,T-AOC、T-SOD、CAT活力,HO-1、NQO1、SOD1、SOD2、CAT及GSH-PX基因的m RNA表达丰度,Nrf2核蛋白及总蛋白、HO-1总蛋白及NQO1总蛋白的表达(P<0.05),显著降低MDA、ROS和PC含量(P<0.05),对热应激肉鸡骨骼肌细胞的保护作用与白藜芦醇预处理效果趋势一致。抑制Nrf2后,白藜芦醇预处理仅造成热应激处理后肉鸡骨骼肌细胞内ROS含量显著降低(P<0.05),HO-1总蛋白表达显著升高(P<0.05),其余指标均差异不显著(P>0.05)。综上所述,本试验从肉鸡鸡胚中成功分离获得了成肌细胞,其在39.5℃培养条件下具有更好的增殖能力,为进一步研究肉鸡肌肉生长发育及营养调控机制提供了体外细胞模型;44.5℃热处理1 h是构建肉鸡骨骼肌细胞热应激模型的适宜条件,为进一步研究肉鸡骨骼肌热应激提供了细胞模型;白藜芦醇缓解肉鸡骨骼肌细胞热应激所致的氧化损伤介导了Nrf2信号通路,为其在缓解肉鸡热应激中的合理利用提供了理论依据。