基于《内经》“七七”理论IVF患者卵泡液代谢组学研究

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目的:  基于《内经》“七七”理论对IVF患者卵泡液进行代谢组学分析,筛选出不同年龄阶段IVF患者卵泡液差异代谢物,并探究其与生殖功能及年龄的关系,从卵泡液代谢组学层面为《内经》“七七”理论是以肾气盛-实-虚-衰为主导的内涵的科学性提供依据。  方法:  临床研究:采取回顾性研究的方法,对因单纯输卵管因素行长方案的191例IVF患者卵泡液进行分析,按年龄将其分为四组,其中21岁≤“三七”组≤27岁47例,28岁≤“四七”组≤34岁74例,35岁≤“五七”组≤41岁41例,42岁≤“六七”组≤48岁29例,比较四组患者的基础资料、获卵结局及胚胎结局等方面的情况。  实验研究:采用超高液相色谱-高分辨质谱联用技术将四组卵泡液样品分别在正离子、负离子模式下进行采集,通过主成分分析法(PCA)、偏最小二乘法-判别分析法(PLS-DA)得到四组间的差异性物质的质荷比,根据得到的精确质量数、同位素丰度比得到与其相匹配的分子式,鉴定出差异物,并把这些差异物通过KEGG聚类分析,指向差异通路,进一步鉴定这些差异物质涉及的代谢通路和所指向的化合物。  结果:  临床研究结果:从“三七”组到“六七”组,患者年龄渐增,差异有统计学意义(P<0.05)、bFSH水平逐渐升高,差异极显著,有统计学意义(P<0.01)、AFC逐渐减少,差异极显著,有统计学意义(P<0.01)、HCG日患者E2水平、取卵日E2水平逐渐降低,差异极显著(P<0.01)、获卵数、MII卵子数、2PN数逐渐减少,差异极显著,有统计学意义(P<0.01),且组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05)、2PN卵裂数、可用胚胎数逐渐减少,差异极显著,有统计学意义(P<0.01);四组患者的BMI、bLH水平、bE2水平、HCG日LH水平、HCG日P水平、取卵日P水平、优质胚胎数、可用胚胎率、优质胚胎率差异无统计学意义(P>0.05)。  实验研究结果:从“三七”组到“六七”组,患者卵泡液中有26种物质具有差异性,主要涉及氨基酸、脂质、激素、维生素等,具体如下:6-Oxohexanoate,L-Phenylalanine,Proline涉及氨基酸降解;Linoleate,Oleic acid,Docosahexaenoic acid涉及脂肪酸代谢;Arachidonate,Hexadecanoic acid,LysoPC(16:1),LysoPC(16:0),LysoPC(18:3),LysoPC(18:2),LysoPC(18:1),LysoPC(18:0),LysoPC(20:4),LysoPC(20:3)涉及脂代谢;13,14-Dihydroretino涉及视黄酸代谢;Dehydroepiandrosterone sulfate涉及甾体类激素代谢;Hyodeoxycholate,5beta-cholestane-3alpha,7alpha,12alpha,23,25-pentol涉及胆酸生物合成;Vitamin D3,25-Hydroxyvitamin D3,13-hydroxy-alpha-tocopherol涉及维生素代谢;stearoylcarnitine涉及肉毒碱穿梭系统;5-Dehydro-episterol,27-Hydroxyc-holesterol涉及胆固醇生物合成;其中下调物有15种:6-Oxohexanoate,L-Phenylalanine,Proline,Hexadecanoic acid,Linoleate,Arachidonate,Oleic acid,Docosa-hexaenoic acid,LysoPC(16:1),LysoPC(20:4),LysoPC(20:3),25-Hydro-xyvitamin D3,5-Dehydroepi-sterol,27-Hydroxycholesterol,5beta-cholestane-3alpha,7alpha,12alpha,23,25-pento;上调物有3种:LysoPC(18:3),LysoPC(18:1),13,14-Dihydro-retinol;有8种物质随年龄增长无规律的递增或递减变化:LysoPC(16:0),LysoPC(18:2),LysoPC(18:0),Dehydroepiandrosterone sulfate,stearoylcarnitine,Vitamin D3,Hyodeox-ycholate,13-hydroxy-alpha-tocopherol。  结论:  1.随年龄增长卵母细胞的数量及质量均呈下降趋势,期间伴随着卵泡液中代谢物的变化,从卵泡液代谢组学层面验证了“七七”理论是以肾气盛-实-虚-衰为主导的内涵的科学性。  2.差异物中6-Oxohexanoate1,L-Phenylalanine,Proline,Hexadecanoic acid,Oleic acid,Arachidonate,Docosahexaenoic acid,Dehydroepiandrosterone sulfate,Lyso PC(16:1),LysoPC(18:1),LysoPC(18:3),LysoPC(20:4),LysoPC(20:3).25-Hydroxyv-itamin D3,13,14-Dihydroretinol,27-Hydroxycholesterol,5beta-cholestane-3alpha,7alpha,12alpha,23,25-pentol影响卵母细胞生长发育及衰老的过程,与女性生殖功能关系紧密,且与女性年龄、生殖功能减退呈相关性,推测这些物质随年龄增长而变化可能是肾气盛-实-虚-衰变化过程引起的结果。  3.Hyodeoxycholate,13’-hydroxy-alpha-tocopherol具体作用机制尚不明晰,其与女性生殖功能的相关性仍需深入探寻。
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