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再生障碍性贫血(简称再障)是由化学,物理,生物因素及其他不明原因所致的骨髓干细胞、造血微环境损伤,红骨髓被脂肪代替,全血细胞减少的一组综合征。急性再障的临床特点是发热,感染,多部位出血。贫血初期不甚,不久即呈进行性加重,患者常有心悸,心慌,气短乏力,面色苍白等。慢性再障常见面色晀白,头晕乏力,形寒怕冷,纳差,腰酸肢软,齿衄,肌衄等。 再障属于祖国医学“虚劳”“血枯”和“血证”的范畴,以脾肾虚为本,在不同阶段可挟有血瘀、热毒、湿热等标实之邪,治疗应扶正祛邪,以补脾肾活血为法,适当合用清热解毒。 现代医学认为再障的发病机理主要为造血干/祖细胞内在性缺陷,异常免疫反应损伤干/祖细胞,造血微环境支持功能缺陷,并采取骨髓移植、脐血输注、免疫抑制、雄激素等治疗方法,但各有其副作用,且对造血微环境方面措施相对较少。在慢性再障的发病中,造血微环境起相对大的作用。中药对慢性再障有显著的疗效,其疗效持久,无明显不良反应,明显优于单纯西医治疗的疗效,其机理在于改善再障中骨髓造血微环境缺陷,促进干细胞增殖,调节免疫,但目前中药对骨髓造血微环境的作用方面的深入研究报道不多。本研究从骨髓造血微环境方面研究其机理,希望能进一步明确中药治疗再障的机理,并为提高再障的疗效提供新的思路。 活髓片是我院血证研究组经过多年的临床实践所研制的,对再障有确切的疗效。方中黄精、补骨脂、枸杞子平补肾阴肾阳,黄芪、人参补脾益气,川芎、当归补血活血,虎杖清热解毒。既往临床及实验研究表明该方对干细胞,免疫,及微环境等三个再障的发病机制均有调节作用,但对造血微环境方面的研究不够深入。 本研究统计了三年来以活髓片为主治疗再障13例,为广州中医药大学第一附属医院的住院及门诊病人,且符合纳入标准者,均为在本科住院,出院后继续门诊治疗。结果表明以活髓片为主的补肾活血法能改善再障患者生活质量,明显缓解症状,提升外周血白细胞,红细胞,血小板及网织红细胞。对本组再障患者13例患者中治愈2例(占15%),缓解5例(占38%),明显进步3例(占24%),无效3例(占23%),总有效率为77%,副反应出现少,安全性高,并改善了治疗前出现的肝功异常等。 实验部分通过兔疫介导的再障小鼠骨髓基质细胞体外培养探索活髓片在骨髓造血微环境方面的作用机理。造模后小鼠于9刁 天濒死,外周血三系下降,骨髓单个核细胞数量减少*倍左右。模型组骨髓体外培养基质细胞生长不良,且大部分处于GJGI期,未进入增殖周期。骨髓单个核细胞对骨髓基质细胞层粘附能力下降,进一步研究表明骨髓单个核细胞表达CD49d及骨髓基质细胞表达CDI帖均下降。此外,骨髓基质细胞层对造血细胞生长的支持作用也有缺陷,表现为基质层上清液支持的粒.单核细胞集落数减少及基质细胞上清液对骨髓造血细胞增殖周期的影响上。 实验表明活髓片对再障小鼠有明显的疗效,l.提升外周血细胞,且使红细胞回升到正常水平。2.提高骨髓单个核细胞数目,促进骨髓基质细胞进入增殖周期,改善基质细胞生长状况。3.上调骨髓基质细胞表面粘附分子VCAM—l(CD106)及骨髓单个核细胞上CD106的受体VLA—4(CD49d)的表达水平,提高骨髓基质细胞对骨髓单个核细胞的粘附能力,使其达到正常水平。4.提高骨髓基质细胞分泌促造血因子的能力,使骨髓基质细胞层支持下的粒一单系集落数增加,及基质细胞培养上清液促进骨髓造血细胞进入增殖周期的功能加强。活髓片提高骨髓基质细胞的粘附能力及促进造血能力,促进基质细胞生长,改善再障小鼠骨髓造血微环境,提升了再障小鼠骨髓造血能力。 活髓片及康力龙对再障的小鼠均有一定疗效,而活髓片促进基质细胞增殖,提高VCAM上表达率及基质细胞粘附功能,对骨髓造血微环境的作用优于康力龙,使其提升红细胞的作用较康力龙更为明显,达到正常组水平。 本研究参照国外骨髓移植患者生存质量量表设计再障的生活质量量表,并同时对中医辨证分型相关的症状进行量化,在中医治疗再障临床研究的症状等软指标客观化方法进行了尝试,进行了补肾活血法对再障小鼠的骨髓造血微环境作用的分子机理研究,进一步明确了活髓片的作用机理,也为提高再障的疗效提供了新的思路。