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目的探讨血管内皮损伤标记物:血管内皮生长因子(VEGF)、血管假性血友病因子(vWF)、组织型纤溶酶原激活物(t-PA)与血栓形成的关系。结合前期研究血液指标,探讨血管内皮损伤标记物与D-二聚体(D-D)、VEGF、纤维蛋白原(FIB)水平和活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)在血栓形成过程中的关系,为寻找预测静脉留置针致血栓形成的指标提供一定的实验依据。方法1.收集标本:回顾收集整理课题组前期研究130例新西兰大耳白兔耳缘静脉石蜡组织标本,分为空白组(n=10),置管组(分为生理盐水组、n=30,生理盐水山莨菪碱干预组、n=30,甘露醇组、n=30,甘露醇山莨菪碱干预组、n=30),置管组留置时间分别为1天、3天、5天不同时段。同时收集前期研究所有的HE病理切片。整理病理蜡块、HE病理切片的编号与组别分别对应前期研究兔子的编号与组别。2.实验方法:首先根据切片流程进行病理切片的制作,然后采用SP免疫组织化学染色法对切片进行染色,染色结束后再采用奥林巴斯显微镜进行免疫组织化学染色结果的图像采集,最后采用Image Pro Plus图像分析件计算免疫组织化学阳性表达面积及内皮细胞面积。结果1.免疫组化结果(1)VEGF表达:各置管组置管1天时VEGF表达减少,置管3天时表达增加,甘露醇干预组不同留置时段VEGF阳性面积占内皮细胞面积比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)vWF表达:各置管组置管1天时vWF表达增加,置管3天、5天时表达减少,生理盐水干预组、甘露醇干预组不同留置时段vWF 阳性面积占内皮细胞面积比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)t-PA表达:各置管组不同留置时段t-PA阳性面积占内皮细胞面积比,相同留置时段,各置管组t-PA 阳性面积占内皮细胞面积比,差异均无统计学意义(P>0.05)。2.免疫组化与血液指标比较结果(1)各置管组VEGF免疫组化于留置1天后开始表达增加,血浆VEGF浓度升高;甘露醇组留置3天、5天,甘露醇干预组留置3天,免疫组化VEGF 和血液 VEGF 为正相关(r=0.723,r=0.942,r=0.818,P<0.05)。甘露醇组留置5天,免疫组化VEGF和血液PT为负相关(r=-0.687,P<0.05)。甘露醇组留置5天,免疫组化VEGF和血液APTT为正相关(r=0.806,P<0.05)。甘露醇干预组留置3天,甘露醇组留置5天,免疫组化VEGF和血液TT为正相关,(r=0.692,P<0.05)。甘露醇组留置3天,VEGF免疫组化表达减少,血浆FIB浓度下降,免疫组化VEGF和血液FIB为正相关(r=0.930,P<0.05)。(2)各置管组vWF免疫组化于置管1天达到高峰,随后开始表达下降。血液VEGF浓度升高,生理盐水组留置1天免疫组化vWF和血液VEGF为负相关(r=-0.781,P<0.05)。甘露醇干预组置管3天,血液D-D浓度下降,与vWF免疫组化趋势一致,免疫组化vWF和血液D-D正相关(r=0.790,P<0.05)。生理盐水组置管3天,血液PT延长,免疫组化vWF和血液PT为负相关(r=-0.810,P<0.05)。各置管组置管1天后,血液FIB浓度升高,置管3天后血液FIB浓度下降,生理盐水干预组留置5天,免疫组化vWF和血液FIB为正相关(r=0.686,P<0.05)。(3)各置管组t-PA免疫组化,除甘露醇组于置管第3天表达减少,其他各置管组置管1天开始表达减少,与血浆VEGF趋势相反,生理盐水组于留置5天时,免疫组化t-PA和血液VEGF为负相关(r=-0.830,P<0.05)。甘露醇干预组留置3天,免疫组化t-PA和血液APTT为正相关(r=0.669,P<0.05)。各置管组置管1天后血浆FIB浓度升高,置管3天后浓度下降,生理盐水组留置1天,免疫组化t-PA和血液FIB为正相关(r=0.713,P<0.05)。结论1.置管早期,血管内皮损伤引起内皮功能障碍,内皮细胞合成分泌VEGF减少,血浆VEGF水平下降,血栓形成后刺激内皮细胞合成VEGF增多,血浆VEGF与变化趋势一致,检测血浆VEGF浓度变化可为预测血栓形成提供一定的依据。2.血管内皮损伤时,内皮vWF表达增加,介导血栓形成,检测vWF为判断血栓形成提供一定的依据。3.内皮损伤标记物与凝血等相关血液指标在静脉留置针致血栓形成过程有相关关系。