【摘 要】
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本研究用纯化的重组EIAV弱毒株基质蛋白作为免疫原,免疫6周龄BALB/c雌性小鼠,运用淋巴细胞杂交瘤技术,通过间接ELISA|、IFA筛选和Western-Blot鉴定,采用有限稀释法,经过3次克
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本研究用纯化的重组EIAV弱毒株基质蛋白作为免疫原,免疫6周龄BALB/c雌性小鼠,运用淋巴细胞杂交瘤技术,通过间接ELISA|、IFA筛选和Western-Blot鉴定,采用有限稀释法,经过3次克隆筛选,获得7株稳定分泌抗EIAV弱毒株基质蛋白的杂交瘤细胞株,分别命名为:1F12、1E2、1E3、4B10、4H7、5E5、4G5。利用所研制的抗EIAV-P15蛋白McAb进行间接免疫荧光法对病原检测具有很高的特异性。经Western-blot分析,7株单抗均能与EIAV弱毒株基质蛋白发生特异性反应。将EIAV-CA基因分为4个重叠基因片段分别在大肠杆菌中表达,用EIAV感染马阳性血清对融合表达的蛋白进行了Western-Blot分析,结果显示,4个基因片段能够表达,将4个表达的蛋白分别命名为:Peptide1、Peptide2、Peptide3、Peptide4,然后,分别用所表达的蛋白和用所获得的单抗分别进行Western-Blot分析,对所获得的单抗进行表位的初步鉴定,结果表明,单抗1E3识别Peptide1;4H7识别Peptide2;4G5识别Peptide3。其它4株单抗不与分段表达的肽段反应,可能是构象依赖性表位。总之本研究在我国弱毒株病毒分子生物学特性的基础上,利用重组的MA蛋白制备了一系列单抗,用分段表达基因片段的方法对其表位进行了初步的鉴定,对深入了解EIAV弱毒株基质蛋白抗原分子特性,成功为准确快速的病原诊断与鉴别诊断奠定了物质基础。
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