青光眼是一种以视神经损害伴进行性视野缺损为主要特征的疾病,已成为全球第二大致盲眼病。流行病学调查资料显示,我国青光眼的患病率为1.68%。在青光眼的众多分类中,原发性开角型青光眼(primary open-angle glaucoma, POAG)占据着较大比例。迄今为止,POAG其病因和发病机制尚未完全阐明。但高眼压是青光眼性视神经损伤的主要危险因素已被广泛认可。其中眼小梁通道对房水排出的阻力增加是青光眼眼压升高的主要原因之一。小梁通道中小梁网细胞(trabecular meshwork, TM),近管结缔组织(juxtacanalicular tissue, JCT)以及Schlemm氏管内壁内皮细胞是形成房水外流阻力的主要部位,而这些组织细胞均表达丰富的肌动蛋白。肌动蛋白构形及细胞与细胞之间的连接、细胞与其周围细胞外基质的连接决定了小梁通道的构形,其结构和分布的改变可引起小梁通达对房水排出阻力的变化。本研究选择可以作用于细胞及组织间肌动蛋白的选择性蛋白激酶抑制剂,临床已应用的药物盐酸法舒地尔(Fasudil Hydrochloride,简称Fasudil)作为处理因素。研究其作用于体外培养的牛眼小梁细胞及离体牛眼,应用形态学、免疫组织化学、分子生物学等方法分别检测药物作用前后离体牛眼房水流畅率及形态学变化；及牛眼小梁细胞形态、骨架蛋白排列及表达量的变化等。将二者结合起来以评价Fasudil对眼房水流出道是否能够减低眼房水外流阻力,增加房水流出,并且通过哪些机制调节流出道的阻力改变。从而为研究及探索原发性开角型青光眼的治疗提供新的思路及新的方向。目的：研究Fasudil对于离体牛眼房水流畅率及前房角形态结构的作用,主要探讨其是否具有降低房水外流阻力,增加房水流出的作用。研究Fasudil作用于原代牛眼小梁细胞,主要探讨其对于细胞形态、骨架蛋白及细胞间连接蛋白等具有何种调节作用。方法：第一部分：我们分别使用GPBS作为对照组、50uMFasudil作为实验组,15mmHg恒压灌注新鲜离体牛眼,测量基线值房水流畅率及加药后房水流畅率(C),计算增加的△C。并且使用红色荧光微球溶液灌注标记房水引流的流体模式,激光共聚焦显微镜观察测量红色荧光微球所示的房水有效滤过面积与房水丛内类似Schlemm氏管的百分比。研究Fasudil是否能够降低房水外流阻力,及探讨其促进房水外流的流体模式变化。第二部分：组织贴块法培养原代牛眼小梁细胞并传代至3-5代,将细胞分为空白对照组,Fasudil组(予luM-1mM不同浓度的Fasudil,诱导0-2h)。分别进行MTT法药物细胞毒性研究,探讨Fasudil作于与眼小梁细胞的安全性。倒置显微镜观察细胞形态学变化、激光共聚焦显微镜观察细胞骨架蛋白F-Actin及细胞间连接蛋白Vinculin的表达及排列变化,从形态学及免疫组化学探讨Fasudil作于与眼小梁细胞骨架蛋白的作用。结果：第一部分：使用Fasudil后,牛眼房水流畅率平均增加0.87±0.13ul/min/mmHg,(48.00+9.33%);而在对照眼其改变仅为0.34±0.03ul/min/mmHg(18.69±3.44%),这一差异在统计学上有显著意义(P<0.01)。使用Fasudil的牛眼较对照组牛眼显示较为均匀的荧光微球分布和沿内壁更广泛的荧光微球标记。使用Fasudil的牛眼,平均有效滤过长度百分比(PEFL)(56.56±4.55%)是对照眼(13.36±3.58%)的4倍(P<0.01)。第二部分：成功培养牛眼小梁细胞,MTT法显示Fasudil干预牛眼小梁细胞2h后,未见明显细胞毒性。在形态学方面中,使用Fasudil后,lOuM-1mMFasudil均能使细胞形态局部皱缩、细长、细胞间隙增宽。在细胞骨架方面,Fasudil干预细胞后,F-Actin在细胞内解聚、重新排列及Vinculin在细胞间连接表达减少,且该作用在浓度和时间上存在双向依赖性。结论：Fasudil作用于牛眼后,可以增加房水流畅率,从而降低房水外流阻力。对于牛眼小梁细胞,Fasudil具有减少细胞骨架蛋白磷酸化,使骨架蛋白重新排列,从而松弛细胞及细胞间连接的作用。且此作用安全无明显细胞毒性,提示其可能成为直接调节小梁途径骨架,降低房水外流阻力从而降低眼内压的一种新型抗青光眼类药物。.