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miRNAs是一类长度约为18~24 nt,在进化上高度保守的内源性的单链小分子,它是骨骼肌发育过程中的关键调控因子。但是到目前为止,每个miRNA在骨骼肌生长发育过程中发挥的作用我们了解的很少。对秦川牛胎牛和成年牛背最长肌中的miRNA进行高通量测序,发现miR-101的表达量均较高。本研究利用RT-qPCR、Western Blot、基因克隆和细胞转染等技术探究miR-101-1对成肌细胞分化的作用以及其作用的靶基因。研究的内容包括揭示了miR-101-1在不同发育时期的秦川牛心、肝、脾、肺、肾、背最长肌、脂肪等组织中miR-101-1的表达谱,探究过表达miR-101-1对成肌细胞分化的影响,验证miR-101-1及其预测靶基因之间的靶向关系。主要的研究结果如下:(1)miR-101-1在中国秦川牛不同发育时期不同组织中的表达谱分析利用RT-qPCR技术获得了miR-101-1在秦川牛胎牛、犊牛、成年牛不同组织(心、肝、脾、肺、肾、背最长肌、脂肪)中的表达谱,发现miR-101-1是一个广谱表达的miRNA,在秦川牛不同发育时期不同组织中都有表达,除了胎牛的脂肪组织。miR-101-1在胎牛的各组织中的表达量明显低于成年牛和犊牛时期各组织中的表达量,但是在胎牛、犊牛和成年牛的各组织中,miR-101-1在背最长肌中的表达量较高,并且在犊牛背最长肌中的表达量最高,在胎牛背最长肌中的表达量最低。表明miR-101-1对秦川牛肌肉发育有着调控作用。(2)miR-101-1的过表达载体的构建克隆牛的miR-101-1前体序列,与pcDNA3.1(+)质粒连接组成重组质粒,转染293T细胞,发现转染重组质粒的细胞中miR-101-1的表达量明显高于转染空载体的对照组和空白对照组,且差异极显著(P<0.001),说明miR-101-1过表达载体构建成功,可用于后续实验。(3)过表达miR-101-1对C2C12成肌细胞分化的影响miR-101-1过表达载体转染C2C12成肌细胞,诱导成肌细胞分化,利用RTqPCR和Western Blot技术在mRNA水平和蛋白水平检测成肌细胞分化标志基因MyOD、MyOG和MyHC的表达量。结果发现,与对照组相比,转染miR-101-1过表达载体的细胞中细胞分化标志基因的表达量明显下降,且差异显著(P<0.05)。表明miR-101-1可以下调这些基因的表达,对成肌细胞的分化有着负调控作用。(4)miR-101-1的靶基因鉴定利用TargetScan软件预测了miR-101-1的靶基因:APP、ACVR2B、GJA1、RXRB。对4个靶基因进行双荧光素酶报告基因系统检测,结果显示,与对照组相比,APP、ACVR2B基因的荧光素酶活性降低,且差异极显著(P<0.001),表明APP、ACVR2B基因是miR-101-1的靶基因。miR-101-1可能是通过降低这两个靶基因的表达来影响细胞分化。