高热量食物的摄入和不合理的膳食结构致使动脉硬化、高血压、静脉血栓等心脑血管疾病的发病率逐年上升,严重影响着人类的健康。而血清胆固醇含量过高则是引起这一系列疾病的重要原因之一。但是其作用机理还处于假说阶段,尚未定论。本论文从体外模型角度继续探索乳酸菌移除胆固醇的作用机理。罗氏乳杆菌普遍存在于人类和大部分动物的肠道中,是目前已报道的具有降胆固醇能力的乳酸菌之一,具有耐酸、耐胆盐和肠道定殖特性,具有研究价值。本文研究发现罗氏乳杆菌JC-I在无细胞参与的情况下仍表现出胆固醇移除能力,其无细胞上清培养液(Cell free supernatant, CFS)的胆固醇移除率可达到68.57%,且移除率随CFS浓度的降低而降低。沉淀圈现象表明JC-I的CFS中含有胆盐水解酶(Bile Salt Hydrolyase, BSH)。CFS通过加热处理和调pH使BSH失活或由BSH作用的共沉淀现象不能发生的情况下,观察CFS是否还表现出胆固醇移除能力,其中BSH活力通过HPLC测得。实验结果表明,经过热处理的CFS胆固醇移除率和BSH活性大幅度降低；CFS的pH值为7.0时,由BSH引起的共沉淀作用不能发生,但是CFS仍具有胆固醇移除能力。因此推断,CFS中含有除BSH以外的可移除胆固醇的有效成分。CFS分别经过乙醇提取、乙酸乙酯萃取、70%硫酸铵处理后,经过盐析获得的蛋白沉淀有较高的移除胆固醇能力。又经TCA处理除去蛋白和SDS使蛋白变性以后,CFS基本丧失移除能力。CFS经多种蛋白酶消化处理后,CFS也失去胆固醇移除能力,进一步说明此有效成分为蛋白质类。本文对此有效蛋白进行了分离纯化,在纯化过程中,CFS通过超滤得到浓缩液,硫酸铵分级沉淀的饱和度范围为50%-70%,获得的蛋白沉淀无BSH活性,但移除胆固醇作用的活性纯化倍数可达5.6。样品通过DEAE Sepharose F.F阴离子交换层析进一步分离纯化。采用pH为7.0、含0-0.5mol/L NaCl的磷酸盐缓冲液进行梯度洗脱时,分离效果较好,得到了电泳纯的目的蛋白,比酶活为61.6U/mg,纯化倍数为11.7。经SDS-PAGE分析,其分子量约为60kDa。