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背景:心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)已经成为一种严重威胁人类生命健康的疾病。在中国,随着社会人口老龄化以及多种危险因素水平上升致使CVD患病率持续增长,且发病年龄提前。急性心肌梗死(acute myocardial infraction,AMI)是冠状动脉粥样硬化性疾病(coronary atherosclerotic disease,CAD)发展过程中最为严重的阶段,具有发病急、致死率高等特点。其发病原因主要是由遗传因素和后天环境因素共同作用。虽然已经报道的一些常见遗传变异有助于CAD和AMI的发展,但仍有许多的分子遗传学机制亟待探讨。依据先前的流行病学相关研究,我们发现先天性心脏病(congenital heart disease,CHD)患者成人的心血管事件和死亡率显着高于一般人群,心肌梗死(myocardial infraction,MI)是导致死亡的主要原因。心脏发育基因的失调可能有助于促进CAD或AMI的发病。然而,GATA6基因不仅在人类胚胎时期的心脏发育生长过程中表达,而且在血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)和不同的原代内皮细胞(endothelial cells,EC)以及小鼠体内的血管EC中均被检测到表达。因此,我们推测GATA6基因启动子区的变异可能作为危险因素参与人类AMI的发生及发展。目的:确认AMI和对照组中GATA6基因启动子区的DNA序列变异体(DNA sequence variants,DSVs)和单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs),并进行数据统计分析,实现对GATA6基因启动子遗传变异的研究。进一步探索与AMI相关的DSVs和SNPs位点是否影响与其他转录因子的结合,并确认其是否改变GATA6基因的转录活性,实现对GATA6基因启动子功能变异的研究,并为AMI的治疗和预防提供遗传学基础。方法:在本研究中,我们采用病例对照研究设计来鉴定和分析AMI患者(352例)和对照组(353例)中GATA6基因启动子区的序列变异体。通过Fisher’s检验的方法对AMI患者和对照组中的每个SNP频率进行Hardy-Weinberg equilibrium(HWE)检验。进行Pearson卡方检验以评估AMI患者和对照组之间的等位基因和基因型频率的差异。通过基于网页的软件SNP-Stats(https://www.snpstats)对五种遗传模型与AMI发病的关联性进行分析。利用HaploView 软件和 SHE-sis 软件平台(http://analysis.bio-x.cn/SHEsisMain.htm)进行连锁不平衡(linkage disequilibrium,LD)和单倍型的分析。通过使用广义多因子降维(generalized multifactor dimensionality reduction,GMDR)软件研究SNP-SNP的相互作用。构建含有目的基因片段的质粒,并转染至体外培养的HEK293和H9c2心肌细胞中,测定荧光素酶的表达水平,从而对鉴定的序列变异体进行功能分析。利用JASPAR在线程序(http://iaspar.genereg.net/)对仅在AMI患者GATA6基因启动子中鉴定的变异体进行转录因子结合位点的影响预测。在体外,选择电泳迁移位移试验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)来检测DNA-蛋白质相互作用。结果:在705例的研究对象中共鉴定出了 10种变异体,包括7种SNPs。一种新杂合 DSV(g.22168409 A>G)和两种 SNPs[g.22168362 C>A(rs1416421760)、g.22168521 G>T(rs1445501474)]仅在三名AMI患者中被发现。相关数据的统计分析,包括AMI患者和对照组之间的等位基因和基因型频率、五种遗传模型、LD和单倍型分析以及SNP-SNP相互作用,均提示无统计学意义(P>0.05)。DSV(g.22168409A>G)和SNP[g.22168362 C>A(rs1416421760)]显著增加GATA6基因启动子的转录活性。EMSA结果显示DSV(g.22168409A>G)和SNP[g.22168362 C>A(rs1416421760)]可影响转录因子的结合。结论:我们研究中的遗传变异分析并未发现有统计学意义的变异位点(P>0.05)。在功能变异分析中的 DSV(g.22168409A>G)和 SNP[g.22168362 C>A(rs1416421760)]可通过影响转录因子的结合来增加HEK-293和H9c2细胞系中的GATA6水平。GATA6基因启动子中鉴定的两种变体是否能通过改变GATA6水平促进人AMI的发展和进展仍需要扩大样本量和进一步的研究来验证。