本文旨在建立位点不依赖性乳腺特异性表达载体,以克服转基因动物生产中因位置效应影响而导致的表达效率低下的问题。同时通过对内源性β-酪蛋白表达与否的检测来筛选出有泌乳功能的乳腺上皮细胞体系,在细胞水平对所构建的乳腺特异性表达载体的合理性、有效性进行检测。引进含有隔离子序列的pWHERE2v.01质粒,对pWHERE2 v.01质粒进行改造,去除隔离子序列间的LacZ基因序列,将回收的片段修饰环化得到新的质粒pWHERE-1（6844 bp）。将目的蛋白BLG-VP2分离,定向克隆入改造后pWHERE-1质粒的两个隔离子序列之间,构建成pW-BLG- VP2位点不依赖性乳腺表达载体。从泌乳期山羊乳腺组织分离得到山羊乳腺上皮细胞体系GMEC,应用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术和免疫组化方法对GMEC细胞中β-酪蛋白表达与否进行检测以评价GMEC乳蛋白合成的功能。同时,比较商品化小鼠乳腺癌细胞C127、人乳腺癌细胞系T47D中β-酪蛋白基因的转录表达。结果表明,原代培养山羊乳腺上皮细胞GMEC-1能够检测到β-酪蛋白基因的表达,在激素诱导下,GMEC-3细胞仍具备乳蛋白合成能力。将构建好的整合位点不依赖性乳腺特异表达载体pW-BLG- VP2利用脂质体载体转染山羊乳腺上皮细胞。激素诱导后,利用RT-PCR技术和免疫组化方法对外源蛋白VP2的表达进行检测。结果表明,外源基因VP2能够在山羊乳腺上皮细胞中表达,证明了所构建的乳腺特异性表达载体的合理性。