目的肝细胞是体外药物毒性筛选和疾病建模中的重要的工具,但是它们的研究严重受限于目前暂无合适的体外肝细胞模型这一问题。故本课题在总结我们先前研究的基础上,建立了永生化的肝前体样细胞（i Hep LPC）及其配套的分化方案,旨在为以制药工业为主的肝细胞工业提供一种可靠而实用的体外肝细胞模型。方法和内容本研究通过增殖曲线、倍增时间及核型分析分析了iHepLPCs的增殖特性,并使用QPCR、PAS、生化检测,分析改良型肝细胞成熟培养基（m HMM）对2D及3D培养的iHepLPCs的分化能力,并通过RNA-Sequence进一步表征。随后使用3D培养联合m HMM分化的iHepLPCs、Hep G2、Hepa RG和原代肝细胞检测了一系列肝毒性药物的肝毒性并比较其毒性反应的差异,并通过6株不同供体来源的iHepLPCs检测药物的异质性肝毒性,通过这些方法证明本研究所研发模型的实用性及可靠性。最后,通过QPCR、PAS、免疫荧光及生化检测分析改良型肝细胞成熟培养基对于Hepa RG细胞系的分化能力,说明m HMM同样具有广阔的应用前景。结果iHepLPCs可以有效扩增至少40次,具有稳定的增殖特性。它们能够在10天内容易地在体外分化回功能性肝细胞。此外,在三维培养条件下,它们形成的肝球体显示出与原代人肝细胞接近的多种肝功能和毒性特征。重要的是,通过产生一定数量的这种细胞系,使得我们在一定程度上模拟群体异质性,这允许我们分析一些药物的特异质毒性。最后,我们发现m HMM也可以在短时间内诱导Hepa RG细胞的成熟。结论iHepLPCs-Hep-3D可作为一种可靠的体外肝细胞模型应用于制药工业及生物人工肝装置的研发。而作为分化体系重要部分的m HMM,也可以作为Hepa RG细胞系的有效分化方式。