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背景与目的可注射性组织工程软骨是组织工程软骨研究的新方向,具有损伤小、易操作等优点[1]。藻酸盐(alginate,ALG)凝胶和透明质酸(Hyaluronic acid,HA)是具有可塑性的组织工程细胞外支架,可用于研究可注射性组织工程软骨的构建[2-4]。肋软骨和残耳软骨可通过体外扩增作为组织工程软骨的种子细胞[5]。本课题利用肋软骨和残耳软骨两种种子细胞,初步研究藻酸钙凝胶和透明质酸钠作为可注射组织工程软骨支架材料的可行性,以及两种种子细胞的差异。方法1.收集先天性小耳畸形患者的肋软骨和残耳软骨,分别体外分离培养肋软骨细胞和残耳软骨细胞,将第3～4代软骨细胞制成ALG-肋软骨细胞凝珠(A组)和ALG-残耳软骨细胞凝珠(B组)(ALG浓度约为25g/L,细胞浓度为1.3×106/mL)。体外培养并通过倒置显微镜观察,分别于1周、2周取材,行HE、Masson染色,评价两种细胞在ALG凝珠中的增殖分化情况。2.第二部分:体外分离培养肋软骨细胞(A组)和残耳软骨细胞(B组),收集第3～4代软骨细胞.分别与HA、ALG混合注射于裸鼠(Nu/Nu,8w大,雄性)皮下。HA实验组行单纯HA注射(润百颜(?),含透明质酸23±0.5mg/mL;0.1mL/点,1点/鼠)、单纯细胞悬液注射(0.1mL/点,2点/鼠)、HA-细胞悬液混合注射(0.1mLHA+0.1mL细胞悬液/点,2点/鼠),于注射后10天、30天、50天取材;ALG实验组行单纯ALG凝胶(0.1mL/点,2点/鼠)和ALG-软骨细胞凝胶(0.1mL/点,4点/鼠)注射,于注射后30天取材。两组取材后行HE、Masson染色,分析不同注射物和注射时间的注射部位真皮胶原密度及真皮厚度的变化。结果第一部分:ALG-软骨细胞凝珠在体外培养2周情况下可呈稳定形态存在,凝珠内软骨细胞生长情况良好,可增殖、分化。第二部分:1.所有时间点的HA-软骨细胞混合注射组未观察到软骨样组织形成,ALG-软骨细胞凝胶注射每个注射点均有软骨样组织形成,44%(16/36)的单纯软骨细胞悬液注射点形成软骨样组织,且最接近成熟软骨,肋软骨细胞组和残耳软骨细胞组无明显差异;2.真皮胶原密度和厚度随注射时间的增加而增加,不同注射物之间真皮厚度和真皮胶原密度的差异不具备统计学意义。结论本研究条件下1.肋软骨细胞和残耳软骨细胞作为软骨组织工程种子细胞差异不大;2.ALG凝胶适合作为可注射性支架材料用于组织工程化软骨的构建;3.高度交联的透明质酸润钠凝胶不适合单独作为可注射组织工程软骨的支架材料。