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研究背景目前,脂肪移植广泛应用于软组织填充和组织再生。然而,移植脂肪成活率偏低是限制脂肪移植广泛应用的瓶颈问题,脂肪获取、纯化及脂肪注射等诸多环节都会影响脂肪成活,其中脂肪纯化是影响脂肪成活的关键因素之一。抽吸物中含有脂肪颗粒、肿胀液、受损的脂肪细胞及其释放的油脂、细胞因子、炎症因子及机械损伤的血管释放出的血液成分等。既往研究已经证实,抽吸物中含有的肿胀液(利多卡因和肾上腺素等成分)、油脂、炎症因子等会降低移植脂肪的成活;而血液对脂肪成活的影响及机制国内外尚未见相关报道。临床上移植用脂肪中的血液以全血形式存在,全血此种综合成分对移植物转归的影响如何,目前亦尚缺乏明确的结论和确切依据。介于此,我们通过动物实验研究全血对移植物转归的影响,同时探讨红细胞在体外对脂肪移植物中关键成分—脂肪干细胞(Adipose stem cells,ASCs)的生物学行为的影响及其可能机制。本研究为脂肪纯化过程中是否去除血液成分提供数据支持,同时探讨可能的相关机制,为改善脂肪移植物质量、进一步提高手术效果提供依据。研究目的1.确认全血含量对脂肪移植物体积保留率和存活质量的影响,为临床如何纯化脂肪提供依据;2.研究血红蛋白(Hemoglobin,Hb)对ASCs生物学活性影响及可能机制,探讨血液对脂肪成活影响的机制。研究方法动物实验:清洗并纯化人腹部来源的脂肪抽吸物,将之与源自同一患者的全血按不同比例混合后构建脂肪移植物,分为20%全血组(A组),10%全血组(B组),5%全血组(C组)和生理盐水(Normal saline,NS)组(D组),分别移植于裸小鼠背部,共48只,每组12只,分别于术后2周、8周取材。检测标本体积保留率、HE染色并做组织学评分、免疫组化染色评估活性脂肪细胞和新生血管数量。细胞实验:胶原酶法获取人ASCs并行三系分化鉴定。同时获取同一患者外周静脉血并提取Hb,并将Hb处理ASCs,以空白组为对照,测定ASCs增殖、迁移、成脂分化和活性氧自由基(Reactive oxygen species,ROS)水平的变化。所有数据采用SPSS 25.0和ImageJ软件行统计学分析。研究结果1.移植物体内体积保留率:移植后2周、8周时,D组均大于A、B、C三组,差异均存在统计学意义(P<0.05)。2.脂肪移植物HE评分:移植后2周、8周时,D组优于其他三组,且差异均存在统计学意义(P<0.05)。脂周蛋白和CD31免疫染色:移植后2周、8周时,D组活性脂肪细胞和CD31阳性新生血管数量均大于其他三组,差异存在统计学意义(P<0.05)。3.Hb对ASCs的影响:与对照组相比,不同浓度的Hb降低了 ASCs的增殖、迁移和成脂分化能力,ROS合成经历先增加后减少的过程,且差异均存在统计学意义(P<0.05)。研究结论1.移植脂肪中的全血降低移植物长期体积保留率和存活质量。临床上,脂肪纯化过程中应尽量去除全血,可能有利于提高移植物长期体积保留率和改善移植物存活质量。2.Hb降低了 ASCs生物学活性(其可能机制为ASCs氧化应激增强导致细胞损伤),进而影响ASCs在脂肪成活中发挥作用,可能为Hb影响脂肪成活的机制之一。