本试验的目的是建立反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法, 以直接从病料中检测病毒(PRRSV),并克隆其ORF5基因，了解河南省PRRSV流行毒株与国内外其它毒株的进化关系，掌握本省猪繁殖与呼吸综合症(PRRS)的流行情况。根据Genbank上BJ-4 毒株的ORF5基因核苷酸序列设计并合成了两对引物AP1/AP2和BP1/BP2，提取来自河南省不同地区（标记为pm,zmd等）病料内的PRRSV的总RNA作为模板，以RT-PCR法分别扩增出696bp和534bp的两个片段，经酶切鉴定后，将696bp片段克隆入PMD18－T vector中进行序列测定。经序列分析发现，所扩增的两个毒株的ORF5基因的核苷酸序列同源性为100％，与北美洲标准株VR2332的ORF5基因的核苷酸序列同源性为99.0％，氨基酸同源性为97.5％，与欧洲毒株同源性为59.3％，氨基酸同源性为53.2％，进化分析表明河南省PRRSV毒株与北美洲毒株有较近的亲缘关系，推测我省毒株与北美洲毒株来自同一祖先。所得序列已公开发表在Genbank上，序列号分别为AY613348和AY613349。将ORF5基因和原核表达载体pET-32a（＋）分别用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切，回收的ORF5基因定向克隆于回收的pET-32a（＋）大片段中，筛选出阳性重组质粒，经IPTG诱导表达，所得产物经SDS-PAGE电泳，做Western－blotting，结果表明得到了特异性的E蛋白。本试验获得了河南省PRRSV的ORF5基因，与国内外其他毒株的ORF5基因比较表明我省PRRS与美洲株亲缘关系较近，本研究为PRRS<WP=6>的分子流行病学及其防治提供参考依据，同时也为本病基因工程蛋白抗原诊断试剂盒及基因工程疫苗的研制打下基础。