苹果茎痘病毒（Apple stem pitting virus ASPV）是苹果和梨树上普遍发生的潜隐病毒之一,该病毒与其它病毒的复合侵染可导致这些果树的衰退。利用基因工程技术导入病毒外壳蛋白（cp）基因,培育抗病毒品种,为病毒病的防治开辟了新的途径。本研究通过PCR扩增和Western blot分析,对转化ASPV的cp基因的14个西方烟（Nicotiana occidentalis）芽系中外源基因的插入及表达进行了检测;采用汁液摩擦接种方法,进行了转化植株的病毒抗性测定;构建了植物表达载体pCAMBIA1301S -cp（+）-gfp和pCAMBIA1301S -cp（-）-gfp,采用农杆菌EHA105介导的叶盘转化法成功转染西方烟。具体研究结果如下:1、以实验室保存的转ASPV cp基因正义链和反义链的14个转基因西方烟芽系为材料,提取基因组DNA,用三对引物进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳分析,得到三个不同的特异性条带,分别为316bp（CP基因的其中一段）、565bp（潮霉素基因）、1203bp（CP基因全长）,确认有13个芽系经6次继代筛选后外源基因得到稳定遗传。2、取PCR鉴定含有ASPV cp的转基因烟草植株S1提取总蛋白,同时以未转基因烟草植株为对照,进行SDS-PAGE电泳。考马斯亮蓝染色结果表明,含ASPV cp的转基因植株有分子量约44 kDa的特异性蛋白条带,而未转基因植株则没有相应的蛋白条带产生。以ASPV多克隆抗体为一抗,碱性磷酸酯酶标记羊抗兔抗体为二抗,对转基因植物中外源基因的表达进行Western blot分析,结果显示,44 kDa大小的特异性表达产物与ASPV多克隆抗体产生明显的免疫反应,表明所转化的ASPV CP基因正义链在转基因烟草植株中能正常表达。3、对部分T₀代转基因烟草离体植株进行生根移栽,在幼苗长至4-6叶龄时接种ASPV进行抗性评价,同时以未转基因植株作为对照。接种15d后观察症状,所有的未转基因植物表现出典型的白色坏死斑;8个芽系S1、S5、S6、S7、S8、S10、A1、A3中的24株都无症状发生,表现出对该病毒的抗性。6个芽系S2、S3、S4、S9、A2、A4中的18株均出现典型症状,表现为感病。4、采用PCR扩增和酶切的方法,回收纯化gfp和ASPV的cp基因,分别构建了ASPV的cp基因正义链和反义链与gfp基因融合的植物表达载体pCAMBIA1301S -cp（+）-gfp和pCAMBIA1301S -cp（-）-gfp。将重组质粒转化根癌农杆菌EHA105感受态细胞,运用叶盘法转化5-6叶期的健康西方烟叶片。经共培养和抗性筛选,已得到转pCAMBIA1301S -cp（+）-gfp和转pCAMBIA1301S-cp（-）-gfp的植株各12和18株。