玉郎伞水提物对汤伤创面的治疗和愈合效果研究

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目的:研究玉郎伞(YLS)水提物对大鼠的烫伤创面治疗效果和愈合情况的研究,对玉郎伞水提物主要药效学研究,使用广泛的基本实验方法按照大鼠和小鼠实验上为阳性对照药,设计了玉郎伞水提物对烫伤创面愈合情况,抗炎作用,镇痛作用,抑菌作用,急性毒性机制,皮肤过敏刺激等实验。试验方法:(1)SD大鼠烫伤创面模型的制备:实验中使用160只SD大鼠,仰卧位固定于造摸木板上,用电动剃毛剪将大鼠背部脊柱两侧的毛剃净,不可损伤表皮,去毛范围左、右各约4cm×4cm,后用脱毛剂15%硫化钠脱完去背部的细毛,再用净水冲洗背后部分.致伤部位:大鼠后背部脱毛区,致伤时间10~12秒,涂药后肉眼观察的创面情况,连续涂药和观察20天,每天用游标卡尺测量创面面积,观察伤口的疤痕和愈合率度情况。(2)KM小鼠实验模型的制备:2.1在抗炎作用上,用80只KM小鼠,分别两个方法抗炎实验:2.1.1对小鼠的耳廓肿胀的实验:50只KM小鼠,分为5组,对照组,阳性对照组地塞米松5mg·kg-1和3组用药分为YLS水提物高剂量组100g生药·kg-1、YLS水提物中剂量组80g生药·kg-1,YLS水提物低剂量组50g生药·kg-1,连续灌胃给药3天.按照100%二甲苯方法测验,然后将小鼠颈椎脱臼处死,沿耳廓基线剪下两耳,称重,以同一小鼠两耳片重量之差表示肿胀度,并计算肿胀抑制率。2.1.2对小鼠的足爪肿胀实验:50只KM小鼠,分为5组,对照组,阳性对照组地塞米松5mg·kg-1和3组用药分为YLS水提物高剂量组100g生药·kg-1、YLS水提物中剂量组80g生药·kg-1,YLS水提物低剂量组50g生药·kg-1,连续灌胃给药3天.按照1%角叉菜方法测验,后将小鼠颈椎脱臼处死,剪取后双足等同部位,称重,以同一小鼠左右后足重量之差为肿胀度,计算肿胀抑制率。2.2在镇痛作用上,用40只KM小鼠,把小鼠两组固定于造摸木板上,仰卧位固定于造摸木板上,用电动剃毛剪将小鼠背部脊柱的毛剃净,不可损伤表皮,去毛范围左、右各约3cm×3cm,后用脱毛剂8%硫化钠脱完去背部的细毛,再用清水冲洗背后部分,分为3组玉郎伞提取组(高,中,低剂量)和生理盐水对照组,对3组YLS用药,每天涂药2次,分别时间涂药为9am,5pm连续涂到3天.最后一天,涂药后30分钟,各组小鼠腹腔注射0.7%醋酸,每只注射0.2ml.并立即观察记录小鼠扭体反应出现时间及15分钟内扭体反应次数。2.3在急性毒性实验,用20只KM小鼠,脱毛,面积约3cmx3cm,后用脱毛剂8%硫化钠脱完去背部的细毛,再用清水冲洗背后部分.对玉郎伞提取组,在后背脱毛区涂上0.5ml玉郎伞提取药物,每天涂药4次,分别时间涂药为9am,11am,3pm,5pm,连续涂到14天。每天观察和测老鼠体重记录。2.4皮肤过敏刺激性实验用70只KM小鼠,分别2个实验方法2.4.1皮肤过敏性实验用30只小鼠,说右边背部毛,面积约3cmx3cm,后用脱毛剂8%硫化钠脱完去右背部的细毛,再用清水冲洗背后部分,小鼠分为3组,生理盐水对照组(A组),0.5%2,4一二硝基氯苯阳性组(B组),YLS水提物组(C组),连续涂药7天,第7天实验,同样涂药右左背部,左背部B组用0.1%2,4一二硝基氯苯浓度涂上。第4次涂药1h后,用清水洗干净全部药物小鼠背部上.即刻观察和并于观察后时间分为12h,24h,48h,72h再次观察皮肤过敏反应情况。2.4.2小鼠的皮肤刺激性实验用40只小鼠,脱毛背部区,分成2个实验,单次涂药和多次涂药-单次涂药实验用20只小鼠,分为2组,YLS水提物组和生理盐水对照组,对YLS提取组用0.5ml YLS提取涂上小鼠脱毛区,后用纱布覆盖上,以防止动物舔食,6h后,用清水洗除药物后肉眼观察并记录涂药物部位有无红斑和水肿情况,时间观察分为30min,24h,48h和72h后。-多次涂药用20只小鼠,分为2组,YLS水提物组和生理盐水对照组,涂药同样方法,连续涂7天,每日一次,每次保持接触6小时,并停药观察3天,记录涂药部位出现红斑及水肿等情况。2.5体外抑菌作用将中药原液以蒸汽高压灭菌8磅20分钟后作为实验药液。将金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、白色念珠菌分别接种琼脂斜面培养基,37°C培养24小时,接种无菌肉汤培养基37°C培养18小时,再接种无菌肉汤培养基37°C培养6小时后,用前用无菌生理盐水稀释成1:1000.取无菌试管10支,第一管加肉汤培养基1.5ml,其余管加1ml肉汤培养基,第一管加所试药液混匀后,使1——9管均含有倍比稀释的药液。即1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128、1:256、1:512、1:1024.第1、2、3、4、5、6、7、8、10管每管加菌液0.05ml第9管不加菌液,混匀37°C培养24小时,再转种无菌营养琼脂平板培养基37°C培养24小时。实验结果:1. YLS水提物对烫伤创面有明显的治疗效果,涂药连续20天后对对照组有特别差异(P<0.05或者P<0.01).YLS水提物分为高剂量,中剂量,低剂量有明显效果,愈合率度比较高P<0.01(高和中剂量)或P<0.05低剂量.YLS水提物分为0.1ml/天,0.2ml/天,0.3ml/天,0.4ml/天,0.5ml/天涂药也有效果治疗,愈合率度比较好P<0.05或P<0.01。2.YLS水提物对抗炎有明显的作用,在小鼠的耳廓肿胀的实验和小鼠的足爪肿胀实验结果YLS水提物高,中,低剂量均能明显抑制小鼠耳廓炎症、足爪肿胀(P<0.05)。3. YLS水提物在小鼠扭体实验中有明显的镇痛作用,对小鼠的有效镇痛时间达2h以上。4. YLS水提物在急性毒性实验有明显的差异,小鼠用药后没出现异常的情况,体重正常对对照组P>0.05。5. YLS水提物在皮肤过敏和刺激性实验中,YLS水提物高,中,低剂量组均未出现相关的过敏和刺激性症状,小鼠很正常的体重,未异常的表现。6. YLS水提物体外对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)为1:64,对大肠杆菌和绿脓杆菌(MIC)为1:4,对白色念珠菌无抑菌作用。本研究结果表明: YLS水提物具有抗炎,镇痛,抑菌,抗感染,改善创面组织结构,促进创面愈合等药理作用。
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