【摘 要】
：
丹参（Salvia miltiorrhiza）是一种使用历史悠久的传统中药,具有预防和治疗心血管疾病的功效,在临床上得以广泛的应用。作为药用模式植物,通过转录因子调控活性成分丹参酚酸和丹参酮的代谢规律是当前研究的热点之一。本文基于基因过表达和CRISPR-Cas9基因定点敲除技术,通过农杆菌介导遗传转化,创制转录因子SmbHLH92基因过表达及基因敲除的丹参毛状根材料,利用高效液相色谱分析方法初步
论文部分内容阅读
丹参（Salvia miltiorrhiza）是一种使用历史悠久的传统中药,具有预防和治疗心血管疾病的功效,在临床上得以广泛的应用。作为药用模式植物,通过转录因子调控活性成分丹参酚酸和丹参酮的代谢规律是当前研究的热点之一。本文基于基因过表达和CRISPR-Cas9基因定点敲除技术,通过农杆菌介导遗传转化,创制转录因子SmbHLH92基因过表达及基因敲除的丹参毛状根材料,利用高效液相色谱分析方法初步探究SmbHLH92对丹参酚酸和丹参酮的调控作用,结合转录组、代谢组分析及酵母单杂交实验,进一步探讨SmbHLH92在丹参次生代谢网络中的作用及作用机制。本研究主要研究结果如下:1、本研究基于丹参基因组和转录组数据库,克隆得到一个在根中高表达的bHLH转录因子基因SmbHLH92,该基因基因全长1303 bp,有3个外显子和2个内含子,编码蛋白含有226个氨基酸,分子量为25.39 KD,理论等电点为6.31,具有保守的bHLH结构域,定位在细胞核中。2、过表达SmbHLH92对丹参毛状根的生长具有促进作用。过表达SmbHLH92的毛状根与对照根系相比生物量显著增加,鲜重提高了1.76-1.82倍,干重提高了1.43-1.56倍;SmbHLH92敲除根系的鲜重和干重与对照根系相比均没有显著变化。3、SmbHLH92对丹参酚酸类和丹参酮类化合物含量具有双重调节作用。基于过表达材料和敲除材料的HPLC分析发现,SmbHLH92正调控迷迭香酸,负调控二氢丹参酮I和隐丹参酮;SmbHLH92表达水平改变都抑制丹酚酸B的积累,而对丹参酮I和丹参酮IIA的积累都有促进作用。4、SmbHLH92对丹参酚酸和丹参酮生物合成途径中的关键酶基因的表达具有双重调节作用。转录组分析发现,过表达SmbHLH92可以使丹参酚酸生物合成通路中关键酶基因Sm4CL6、Sm4CL8、Sm RAS5显著上调,Sm RAS表达水平显著下调;丹参酮生物合成通路关键酶基因Sm HMGR3和Sm HMGR4表达水平显著上调,Sm DXS3、Sm MDC、Sm MCT表达水平显著下调;Sm GPPS.LSU、Sm GPPG.SUII.2、Sm GGPPPS2、Sm CPS5表达水平略有上调,Sm HMGS、Sm DXR、Sm FPPS、Sm GGPPS、Sm GGPPS3表达水平略有下调。5、通过酵母单杂交实验,发现SmbHLH92转录因子能和丹参酮类化合物生物合成途径中的Sm HDS1、Sm CPR、Sm CPS4、Sm DXS5、Sm MCS、Sm GPPS.LSU、Sm DXR、Sm HDR2、Sm HMGR4、Sm GPPS.SUII.2、Sm AACT2的启动子上的G-box结合,结合转录组的结果分析,SmbHLH92在丹参毛状根中可能通过直接结合Sm HMGR4、Sm GPPS.LSU、Sm GPPS.SUII.2、Sm DXR启动子的Gbox来调控丹参酮生物合成通路酶基因的表达,进而调控丹参酮类化合物的生物合成。
其他文献
在大力倡导全球经济一体化的今天,加上中国经济的快速发展和进步,到中国来投资的外资企业也是越来越多了。就光纤市场而言,中国的光纤产业正在快速发展。未来的数年内全球对光纤的需求将持续增长,其中中国的需求增长将位于首位,行业未来的发展趋势将以具备高附加价值、创新化的差异产品为代表。F公司作为一家外商独资光纤企业,其所有产品都在国外生产,在中国光纤市场虽然有着巨大的机遇但同时也带着挑战,因此F公司营销战略
精准医疗是医学界公认的未来癌症治疗方向,这几年在政策红利和资本的推动下,行业规模迅速扩大,也成为提高人民健康生活水平的战略性发展产业。处于产业链上游的基因组学产品供应的跨国公司通过产品的技术和渠道壁垒形成了短期内寡头垄断格局,但在近几年的中美贸易摩擦以及竞争环境复杂化的情况下,这些跨国企业在中国的经营策略受到了严峻的挑战,开始试图确立合理的市场定位、调整销售业务管理方式、完善业务处理流程,并另辟蹊
A公司作为较早进入中国市场的国际大型游乐设施制造商,在中国市场取得了非常好的发展,确立了销量领先的市场地位。但是随着产业发展和内外部环境的变化,不可避免的将会面临着激烈的竞争。如何通过优化市场营销策略,保持A公司在华市场的销量优势地位,对于其具有重大现实意义。本文基于4C营销理论,通过深度访谈发现A公司面临如下问题:对于大客户的依赖度比较高;仓储物流成本对其价格竞争优势形成威胁;研发周期过长可能对
青少年抑郁症流行病学估计终生患病率高达14%～20%。青少年抑郁症有6倍的可能性尝试自杀,自杀未遂者的自杀危险性远高于一般人群。执行功能损害在抑郁症青少年的自杀行为中起主要作用。然而目前对伴自杀未遂青少年抑郁症患者治疗效果不理想,有效的替代治疗或补充治疗亟待探索。基于神经调控的间歇性θ爆发式磁刺激（i TBS）是一种治疗抑郁症的新型经颅磁刺激（TMS）模式,但是迄今尚无利用i TBS干预青少年抑郁
弱视是现代人视力障碍的主要原因之一,发病率可达4%,弱视的治疗关键年龄是6-8岁之前,早诊断早治疗对于弱视的控制有着重要的意义。目前的弱视诊断方法存在对患者配合要求度高、指标单一、检出率过高等问题,低龄儿童有一定的误诊风险。另外,目前弱视主要依据其弱视危险因素分类,对于不同类型弱视的区别治疗贡献价值不高。依据弱视眼动方面缺陷,眼动仪作为一种非侵入式认知行为学研究设备,不仅要求的配合度较低,而且可析
老年抑郁症是发生在老年期的抑郁症,其主要表现为情绪情感障碍、认知障碍。当前我国正步入深度老龄化阶段,老年抑郁症发患者数迅速增长,相关医疗成本增加,同时老年抑郁症对患者生活能力有巨大的损害,影响了原本健康幸福的晚年生活,也阻碍了银发经济的发展。目前,老年抑郁症的认识仍较稀少,发病机制欠明确,其发病机制假说主要有皮质下出血性抑郁假说、脑内神经递质5-羟色胺受体假说等;另有研究者从老年抑郁症—轻度认知障
目的 分析血清骨生成诱导因子（osteoinductive factor, OIF）和微小核糖核酸（microRNA, miR）-22-3p在2型糖尿病肾病（type 2 diabetes nephropathy,T2DN）早期诊断中的价值。方法 选取2018年3月～2020年3月重庆医科大学附属遂宁市中心医院2型糖尿病患者190例为研究对象，根据24h尿微量清蛋白排泄率（24 hour urin
精神疾病在发病前就已经存在一段特殊的时期,被称为精神病风险综合征（Psychosis Risk Syndrome,PRS）。现有的功能磁共振成像研究表明,大脑的功能异常连接对探索精神疾病的病理生理机制十分重要。特别是,三核心脑网络模型的提出,强调默认模式网络（Default Mode Network,DMN）、中央执行网络（Central Executive Network,CEN）、突显网络（S
随着我国在基础设施建设方面的投资力度不断加大,工业化进程加快推进,铝材加工行业也得到了稳步提升。此外,铝材产品由于自身质量轻、高导性、耐腐蚀性等优良特性,使其在各个行业中的应用和需求得到进一步地提升,国内铝材企业生产规模不断扩大,使得中国已经成为全球最大的生产铝和消费铝的大国。在铝材行业快速发展的大环境中,人工成本的增加、自主研发能力不够强、产品同质化严重等问题导致企业的核心竞争力低下,进一步阻碍
包裹着整个细胞的细胞膜是所有生命中必不可少的结构要素。它们由脂质和蛋白质的混合物组成,能够严格调节能量、信息、营养和代谢产物的流动。脂质-蛋白质相互作用是细胞膜行使一些功能时的决定性因素,膜的脂质成分构成也对一些以膜蛋白为靶向的药物至关重要。计算模拟方法,特别是分子动力学,可以在实验方法难以达到的原子层面研究细胞膜和膜蛋白的结构、动力学及其相互作用。近年来粗粒度力场特别是Martini粗粒度分子力