【摘 要】
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目的:1.建立高脂高糖诱导人主动脉内皮细胞（human aortic endothelial cells,HAEC）损伤模型,转染药物后使细胞内mi R-31高表达,探究mi R-31对高糖高脂诱导的HAEC损伤是否有保护作用及其机制。2.使用过表达mi R-31的转基因FVB小鼠和FVB小鼠,探索2型糖尿病（type2 diabetes,T2DM）小鼠模型的建立条件,观察mi R-31对T2DM
【基金项目】
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国家自然科学基金项目“miR-31调控星形胶质细胞增殖促进脊髓损伤后运动功能恢复的机制研究（编号:82001326）”； 山西省应用基础研究计划项目“基于miR-31的调控作用探讨脊损伤修复的分子机制（编号:201901D211319）”； 山西省应用基础研究计划项目，miR-31调控神经组织再生促进脊髓损伤修复的作用机制研究（编
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目的:1.建立高脂高糖诱导人主动脉内皮细胞（human aortic endothelial cells,HAEC）损伤模型,转染药物后使细胞内mi R-31高表达,探究mi R-31对高糖高脂诱导的HAEC损伤是否有保护作用及其机制。2.使用过表达mi R-31的转基因FVB小鼠和FVB小鼠,探索2型糖尿病（type2 diabetes,T2DM）小鼠模型的建立条件,观察mi R-31对T2DM形成、糖脂代谢、脏器损伤是否有保护作用,探究mi R-31对T2DM并发血管损伤是否有保护作用及其相关机制。方法:1.依照实验室前期结果,采用30 mmol·L-1高糖（high glucose,HG）联合0.1mmol·L-1棕榈酸钠（sodium palmitate,SPA）诱导HAEC高脂高糖损伤模型,来模仿罹患2型糖尿病患者体内的HAEC状态。将HAEC分为高脂高糖诱导后mi R-31agomir转染组（mi R-31+DM）,高脂高糖损伤组（DM）和对照组（C）,mi R-31+DM组使用mi R-31 agomir转染细胞,经细胞免疫荧光和RT-q PCR确定转染成功。采用细胞增殖实验和细胞划痕实验比较各组细胞功能,采用RT-q PCR测定FIH、HIF-1α和VEGF-A m RNA的相对表达水平,进一步用Western blot测定FIH、HIF-1α和VEGF-A的蛋白质相对含量。2.参考文献,确立采用高脂饮食（high fat diet,HFD）喂养联合腹腔注射链脲佐霉素（streptozotocin,STZ）诱导T2DM小鼠模型。在FVB小鼠及过表达mi R-31的转基因FVB小鼠中,以HFD喂养8周、禁食14时、连续腹腔注射5天为固定条件,监测小鼠在不同浓度STZ诱导后至14天内小鼠的血糖变化情况,并观察高表达mi R-31对T2DM形成的影响。3.将小鼠随机分为过表达mi R-31转基因小鼠的对照组（31-C）、FVB小鼠的对照组（FVB-C）、过表达mi R-31转基因小鼠诱导2型糖尿病组（31-DM）和FVB小鼠诱导2型糖尿病组（FVB-DM）。STZ诱导为T2DM后继续以HFD喂养5周,麻醉小鼠后使用超声心动图监测心脏功能。定期观察并记录各组小鼠体重、进食、饮水、排尿、行为及精神状态等一般情况,采用OGTT、ITT和HOMR-IR评估小鼠糖代谢情况。安乐死小鼠后立即采血,用ELISA试剂盒测定TC、TG、LDL-C和HDL-C,评估小鼠脂代谢情况;测定血清NO浓度,评估内皮细胞功能。分离小鼠的心、肝、肾、胰腺,计算器官指数并进行组织形态学分析;分离小鼠主动脉,用于组织形态学分析和免疫荧光分析,进一步用Western blot测定FIH、HIF-1α和VEGF-A的相对蛋白水平。结果:1.在细胞实验中,mi R-31 agomir的最适浓度选用50 n M,转染后测定细胞中的mi R-31表达量显著增加。高脂高糖诱导HAEC后,细胞增殖和迁移能力减弱,mi R-31会改善这种作用,可能是由于mi R-31靶向FIH,上调了HIF-1α和VEGF-A的表达。2.HFD喂养8周后,禁食14时,连续5天腹腔注射45 mg·kg-1的STZ可诱导出稳定的T2DM小鼠模型,同时mi R-31一定程度上延缓了T2DM的形成。3.mi R-31制约了T2DM的发展,改善了T2DM小鼠的糖代谢紊乱和脂代谢紊乱,抵御了糖尿病性的脏器损伤。4.mi R-31通过上调HIF-1α和VEGF-A的表达水平,改善T2DM并发血管损伤。结论:在HAEC发生高脂高糖损伤时,mi R-31可以通过靶向FIH、上调HIF-1α和VEGF-A的表达来提高HAEC的增殖和迁移能力;在2型糖尿病小鼠中,mi R-31改善了2型糖尿病的形成和发展,同时,mi R-31通过上调HIF-1α和VEGF-A的表达,对糖尿病性血管损伤发挥保护作用。
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