凋亡抑制蛋白XIAP在肝癌细胞化疗耐药中的作用研究

来源 :中国人民解放军军医进修学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:aws134
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目的:研究X染色体连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein)基因及蛋白表达水平对不同剂量5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的影响,为改善肝癌治疗的现状提供新的思路。方法:澳大利亚Latrobe大学Vaux教授惠赠含XIAP基因全长的真核表达载体pef-XIAP后进行质粒的回收、扩增并使用PCR及双酶切方法鉴定。鉴定质粒可用后,采用脂质体介导转染方法将pef-XIAP质粒转染人肝癌细胞HepG2中,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western Blotting检测XIAP基因和蛋白表达水平。转染成功后,通过不同浓度5-Fu诱导细胞凋亡,使用CCK-8试剂通过比色法分析检测5-Fu对转染pef-XIAP的HepG2细胞与对照组细胞生长活性的抑制作用。结果:1、获取质粒经双酶切及PCR检测均呈现特异性单一条带,证明质粒可用。2、RT-PCR检测XIAP基因表达显示转染pef-XIAP的HepG2细胞XIAP表达量明显提高,与对照组细胞相比有显著性差异(P<0.05)。3、Western Blotting检测XIAP转染pef-XIAP的HepG2细胞XIAP蛋白表达明显增高与对照组细胞相比有显著性差异(P<0.05)。4、在10ppc、1ppc、0.1ppc浓度5-Fu作用下实验组细胞生长抑制率明显低于对照组(P<0.05)。结论:1、通过分子生物学基因工程手段可明显提高HepG2细胞XIAP基因及蛋白表达。2、XIAP基因在人肝癌细胞HepG2中的高表达可以明显降低化疗药物5-Fu诱导的细胞凋亡,其在肝癌化疗耐药中发挥一定作用。
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