【摘 要】
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目的:建立外源性正义寡核苷酸片段抑制胶原启动子相关基因表达的观测方法,探索应用外源性正义寡核苷酸抑制人病理性瘢痕胶原基因转录的可能性。材料和方法:人皮肤瘢痕疙瘩成
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目的:建立外源性正义寡核苷酸片段抑制胶原启动子相关基因表达的观测方法,探索应用外源性正义寡核苷酸抑制人病理性瘢痕胶原基因转录的可能性。材料和方法:人皮肤瘢痕疙瘩成纤维细胞原代培养;构建含有人α1(I)胶原基因启动子-2483---+42bp序列的PGL-3报告基因的重组体;人工合成转录因子Sp1、Ap1特异识别的双链寡核苷酸序列;用脂质体法将PGL-3报告基因重组体转染瘢痕疙瘩成纤维细胞作为对照,实验组再转染Sp-1、Ap-1正义寡核苷酸片段,萤光素酶检测系统检测此重组体萤光素酶的表达。结果:重组体PGL3- 2. 5k和Ap1、Sp1正义寡核苷酸双链均可转染瘢痕成纤维细胞;PGL3-2.5k重组体启动子序列和Sp1、Ap1特异识别的双链寡核苷酸皆可与Sp1、Ap1发生特异性结合。实验组(转染PGL3- 2. 5k和Ap1、Sp1正义双链寡核苷酸)与对照组(只转染PGL3- 2. 5k)的荧光素酶表达相比较,差异具有显著性意义(P﹤0.01)。结论:构建的重组体PGL3- 2. 5k可以用于瘢痕疙瘩成纤维细胞中启动子活性的研究;PGL3报告基因重组体的高灵敏性非常适用于α1(I)胶原基因启动子活性的研究;正义寡核苷酸引入瘢痕成纤维细胞后,胶原启动子活性降低的实验结果表明,应用正义寡核苷酸技术有可能通过其对胶原基因转录激活的抑制作用,实现病理性瘢痕异常增生的控制。
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