艾柱质量评价方法与艾烟毒理实验研究

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目的:拟通过对不同艾柱进行系统的差异性分析,为艾柱的质量控制标准提供方法参考。拟通过开展艾烟的毒理实验研究对艾烟作初步的安全性评价,进而为艾灸疗法的推广与应用提供初步的实验数据和理论依据。方法:1.艾柱质量评价实验选取了处于不同价格区间的十二种品牌艾条,采用热电偶技术测各艾条温度,采用太赫兹波检测手段分析各艾条的1-373个波段的太赫兹波变化,采用顶空气质技术对各艾条燃烧后产生的艾烟进行成分分析,再结合各艾条中艾绒的显微观察综合评价十二种艾条的质量优劣,筛选出质量相对稍差者。2.艾烟急性毒性实验将36只雄性SD大鼠随机分为6组,根据预实验结果每组全死的最小剂量为A组,而每组全不死的最大剂量设为E组,中间三组即B、C、D组按等比关系确定剂量,F组为空白对照组。实验时将动物放入自制的染毒柜中,每组染毒2 h,存活大鼠经过14 d的观察期后进行解剖处理,计算艾烟LC50,对各组大鼠的脏器指数进行单因素方差分析,并采用HE染色法对各组大鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏做病理切片以观察脏器是否有病理变化。3.肝脏代谢组学实验首先将艾烟急性染毒后的大鼠肝脏进行样本前处理,对所得上清液经有机滤膜过滤后转移至液质小瓶中待测,采用高效液相色谱手段进行样本检测。之后进行代谢组学数据处理,通过Mass Lynx 4.1采集样本信息,通过HMDB数据库对筛选出的差异化合物进行鉴定,将其导入Metabo Analyst 5.0数据库进行差异代谢物的含量变化分析和有关代谢通路分析。4.艾烟亚慢性毒性实验根据急性毒性实验得到的LC50,将64只雄性SD大鼠随机分为4组,分别为高、中、低剂量艾烟组以及空白对照组,每组大鼠给予不同剂量的艾烟进行染毒,高、中、低剂量艾烟组分别取急毒实验LC50的1/5,1/25,1/125,空白组不做艾烟染毒处理,其他同染毒组。每组大鼠每天同一时刻,在不同剂量艾烟以及空气混合物中染毒2h后静养,每周染毒5天静养2天,连续染毒三个月。每组取一半大鼠即8只大鼠进行解剖处理和血液指标检测、病理切片及免疫组化分析,另一半大鼠则在恢复一个月后进行同样的处理和指标检测分析,探讨艾烟染毒后各组大鼠的行为状态及生理病理变化。结果:1.在十二种品牌艾柱中,C品牌艾柱可达到的最高燃烧温度最低,其太赫兹波强度最低,C品牌艾柱艾绒中可见较少较不扭曲的非腺毛,以及较多较大的叶肉组织碎块,在其中检测出较高浓度的苯酚,并且检测到的毒性化合物含量占总化合物含量的比值较大。根据各方面综合评价认为C品牌艾柱相对较差,选它做接下来的毒理实验。2.实验得艾烟LC50为2451.32 mg/m~3,染毒过程中各组大鼠的外观体征以及行为活动没有明显差异,最高剂量的艾烟组与空白组相比,所有脏器指数均有显著性差异,最低剂量艾烟组与空白组之间所有的差异均没有统计学意义,脏器指数是否有显著性差异与艾烟剂量有关。观察病理切片发现艾烟剂量越高,大鼠的心脏、肝脏、肺脏、肾脏病理变化相应越明显,而脾脏的损伤不明显。3.在正、负两个离子模式下正常组与艾烟组均分离明显,分离效果较好,数据稳定。艾烟染毒后,与正常组比较,一共有38个化合物的含量发生显著变化,正离子模式下有14个物质的含量显著上调,11个物质的含量显著下调;负离子模式下有5个物质的含量显著上调,8个物质的含量显著下调。艾烟组大鼠一共发现15条代谢通路,包括甘油磷脂代谢等。4.各组大鼠一般状态差异不明显,整个染毒及恢复的过程中,没有大鼠死亡,总的来说,艾烟染毒后的大鼠体重组间对比没有显著差异。染毒后及恢复后较高剂量组的心、肝、肺脏指数与空白组相比有显著性差异(P<0.05,P<0.01),血气及血常规指标大多在其正常值范围内变化波动。染毒后,高、中剂量组的TBIL与同期空白组相比,极显著升高(P<0.01);高、中、低三个剂量组的LDH与同期空白组相比极显著增高(P<0.01),具有统计学意义,其余生化指标则无显著性差异或者在正常范围内变化。染毒后心脏、肝脏、肺脏、肾脏随着艾烟剂量的增大而产生一定的病理变化,恢复后病理变化有所改善,但依然和艾烟剂量密切相关,脾脏损伤不明显。染毒后大鼠肺组织NF-k B平均光密度值高剂量染毒组极显著高于空白组(P<0.01)。结论:1.可从艾柱的光热特性、艾绒的显微观察及艾烟的成分多角度去探讨艾柱质量,艾柱发射的太赫兹波强度越强,可达到的最高燃烧温度越高,艾绒纯度越高及艾柱燃烧烟雾中释放的有害物质越少,可能提示该艾柱质量更优。2.根据急性毒性(GB30000.18—2013),将艾烟归为类别5,意味着吸入可能有害,高浓度的CO可能是艾烟急性毒性实验中大鼠死亡的主要原因,另外还可能受艾烟中其他有害成分的影响,有待进一步研究。3.艾烟可明显改变大鼠体内的代谢物水平,其急性毒性机制可能与甘油磷脂代谢、花生四烯酸代谢、亚油酸及亚麻酸代谢等有关。4.长期反复进行艾烟染毒对大鼠的一般行为和状况影响不明显,对部分血气、血常规和生化指标有影响,通常是较高剂量的艾烟导致,并且高剂量艾烟染毒对大鼠肺组织NF-κB蛋白的表达有一定的影响,推测长期较高浓度的艾烟环境下可能会导致机体产生一些损伤。5.艾烟的毒性与其浓度剂量密切相关,高浓度的艾烟会导致大鼠产生更为严重的病理变化,在日常艾灸治疗与保健中,要注意做好通风措施,控制室内艾烟浓度及人体吸入艾烟量。
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