【摘 要】
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[目的]探讨外源性p21Waf1-p27Kip1基因联合转染对人乳腺癌细胞细胞增殖及中心体复制的影响和意义。[方法]应用脂质体介导法分别将构建的pIRES-p21Waf1、pIRES-p27Kip1、pIRES
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[目的]探讨外源性p21Waf1-p27Kip1基因联合转染对人乳腺癌细胞细胞增殖及中心体复制的影响和意义。[方法]应用脂质体介导法分别将构建的pIRES-p21Waf1、pIRES-p27Kip1、pIRES-p21Waf1-p27Kip1真核表达载体,转染入常规培养的人乳腺癌细胞系MCF-7,未转染组、转染空质粒组细胞做对照,Western免疫印迹法验证转染前后p21Waf1、p27Kip1基因蛋白表达情况；MTT法绘制细胞生长曲线；流式细胞仪检测细胞周期DNA分布变化；免疫荧光技术检测转染前后中心体复制的变化情况。[结果]Western免疫印迹法证实p21Waf1、p27Kip1、p21Waf1-p27Kip1基因转染24h后,其蛋白表达量明显增多(P<0.01),与对照组比较,各转染实验组细胞生长明显受抑制(P<0.01),细胞周期大部分停滞于G1期,各实验组G1期和S期细胞比例依次为：(69.52±3.21)%、(18.38±2.51)%,(60.83±3.02)%、(24.52±1.89)%,(78.37±2.83)%、(15.27±1.74)%,对照组则为(47.28±2.25)%、(33.52±1.97)%,中心体复制异常的乳腺癌细胞数较转染前(13.47±0.33)%明显减少：(5.07±0.38)%,(6.28±0.35)%,(3.47±0.23)%,两两比较差异显著(P<0.01)。[结论]外源性p21Waf1和p27Kip1基因转染可抑制人乳腺癌细胞的增殖及中心体的异常复制,二者联合转染时效果显著。提示,乳腺癌的发生、发展是多基因、多因素共同参与的过程,p21Waf1和p27Kip1在调控细胞增殖及中心体复制方面具有协同作用,对于p21Waf1、p27Kip1基因失活、低表达或不表达的乳腺癌,联合转染外源性p21Waf1、p27Kip1基因不失为一种有效的治疗手段。
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