恶性肿瘤又称为癌症,是目前世界上第二大死亡因素,最新数据显示全世界癌症造成的新发病例和死亡人数都在大幅度增加。而结直肠癌（Colorectal Cancer,CRC）是世界上最常见的癌症之一,其发病率和死亡率分居全球第3和第2,严重威胁人类的健康安全,因此对癌症的探索刻不容缓。癌症的主要特点是细胞调控机制失控,细胞生长和分化出现异常,并常伴随局部组织浸润的发生。就结直肠癌而言,其发病机制复杂,发展时间缓慢,整个过程涉及到多个基因突变,其中与肿瘤发展密切相关的基因被称为肿瘤易感基因。这些基因可能参与细胞的周期转换、基因修复等重要生命活动,所以聚焦于肿瘤易感基因有助于对肿瘤的深入研究及精准治疗。全基因组关联研究（Genome-Wide Association Studies,GWAS）是在全基因组的单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphism,SNP）范围中寻找与复杂疾病相关SNP的一种研究方法。GWAS可以检测与复杂疾病相关的常见遗传变异,最终将其转化为研究或治疗策略。近十年来GWAS发现了许多与结直肠癌相关的易感基因和基因变异,但是却无法阐述清楚易感基因在疾病发展过程中的生物学机制,也无法说明位于非编码区的SNP的生物学功能。本研究拟采用一种新型的SNP及其结合蛋白研究策略,旨在探究VTI1A基因座上结直肠癌相关的SNP在结直肠癌发展过程中的调控作用。具体如下:1.鉴定结直肠癌相关候选功能性SNP（Functional SNP,f SNP）。鉴定过程采用EMSA实验和双荧光素酶报告基因实验,在细胞内和细胞外双重验证候选SNP的功能性。2.破译f SNP特异性结合蛋白。本研究通过特异性DNA片段竞争性结合质谱鉴定蛋白质技术（Specific DNA Competitor Pulldown-Mass Spectrometry,SDCP-MS）,用特异性的DNA片段竞争结合蛋白并进行质谱分析,快速获取f SNP片段结合蛋白;利用AIDP-WB（Allele Imbalanced DNA Pulldown-Western Blots）实验验证结合与f SNP位点等位基因结合的差异性。3.探究f SNP调控蛋白对VTI1A的调控功能。探究过程采用si RNA进行基因敲低,研究转录因子对VTI1A基因转录等过程的调控作用。本研究按照以上实验思路验证VTI1A基因座上10个候选f SNPs,最终获得7个f SNPs,我们选取其中3个重点研究,分别是rs12241008、rs4414150和rs17129851,并获取多个结合蛋白;在这些结合蛋白中,本研究选取并验证了HNRNPM、DDX21和GAPDH与rs12241008的结合情况,TCOF1、TUFM和AHNAK与rs4414150的结合情况,实验结果显示除AHNAK以外的5个蛋白与SNP结合时都存在等位基因不平衡性现象;接着本研究利用si RNA技术在细胞水平上敲低这5种蛋白的表达水平,结果发现HNRNPM、DDX21和TCOF1对VTI1A基因表达有明显的调控作用;最后选取HNRNPM、DDX21在结直肠癌细胞系中进行功能验证,发现均能促进结直肠癌细胞系的增殖和迁移,且两者之间存在一定的相互作用。本实验为后续结直肠癌中HNRNPM和DDX21的功能机制研究提供理论依据。综上所述,本研究通过这一系列研究方法验证了VTI1A基因在结直肠癌发展中的重要作用,并重点研究了SNP rs12241008影响结直肠癌的调控网络,为结直肠癌的早期筛查和后期精准治疗提供了实验依据和新的靶点。