论文部分内容阅读
目的：研究荷载IL-24基因的条件增殖型腺病毒ZD55-IL-24、KI67-ZD55-IL-24联合烷化剂替莫唑胺对黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响并探讨其可能的协同促凋亡机制。 方法：腺病毒转染HEK293细胞，扩增，测定滴度。将PBS、ZD55-EGFP、TMZ、ZD55-IL-24、KI67-ZD55、KI67-ZD55-IL-24、ZD55-EGFP联合TMZ、ZD55-IL-24联合TMZ、KI67-ZD55-IL-24联合TMZ分别作用于黑色素瘤A375、M14细胞。CCK8法检测细胞增殖;结晶紫法检测细胞毒性;免疫细胞化学法检测病毒Hexon蛋白及KI67基础表达;Annexin V-FITC/PI及Hochest33258法检测细胞凋亡情况;Western Blot法检测腺病毒E1A、IL-24蛋白及MGMT，Bax、Bcl-2、Mcl-1、Procaspase-3、NF-κB、P53凋亡相关蛋白的表达情况。 结果：腺病毒ZD55-EGFP、ZD55-IL-24、KI67-ZD55、KI67-ZD55-IL-24的滴度分别为7.1×109 ifu/ml，4.0×1010 ifu/ml、1.4×1010 ifu/ml、1.9×1010 ifu/ml; CCK8结果表明ZD55-IL-24、KI67-ZD55-IL-24联合TMZ对黑色素瘤A375、M14细胞均有明显的抑制增殖作用，中效原理分析提示两者有协同作用;结晶紫实验提示KI67-ZD55-IL-24的细胞毒性强于ZD55-EGFP、ZD55-IL-24、KI67-ZD55;免疫细胞化学实验提示KI67在3种黑色素瘤细胞株A375、M14及MV3中高表达，TMZ不影响病毒的复制;Annexin V-FITC/PI及Hochest33258结果表明ZD55-IL-24、KI67-ZD55-IL-24联合TMZ作用于A375、M14细胞凋亡效应明显增加;Western Blot结果表明ZD55-IL-24、KI67-ZD55-IL-24联合TMZ作用的A375、M14细胞能复制并表达IL-24，同时Bax的表达量增加，Mcl-1、Bcl-2的表达量均降低，Procaspase-3发生了明显剪切;ZD55-IL-24、KI67-ZD55-IL-24可引起黑色素瘤细胞p53蛋白表达上调，MGMT蛋白表达下调。 结论：携带IL-24基因的条件增殖型腺病毒ZD55-IL-24、 KI67-ZD55-IL-24联合化疗药物TMZ有协同抑制黑色素瘤细胞增殖、促进凋亡的作用。这种肿瘤的化学药物-靶向基因-病毒联合模式的疗效优于单独化疗或单独病毒基因治疗。