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目的:
卵巢癌是常见的妇科肿瘤,常规治疗为手术切除辅以铂类和紫杉醇为基础的化疗,晚期常复发,发展为铂类和紫杉醇的耐药,是治疗失败的主要原因之一,紧迫需要新的治疗策略和靶点。姜黄素具有抑制肿瘤细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡的作用,因其抗癌谱广,毒副作用小,美国国立肿瘤研究所已将其列为第三代肿瘤化学预防药物。
BRCA1是一种抑癌基因,与遗传性乳腺癌关系密切,近年来研究表明在散发性卵巢癌中BRCA1基因突变也较常见,且多种信号通路参与了BRCA1的抗肿瘤作用。
本实验应用MTT法和RT-PCR法检测姜黄素对鼠转基因卵巢癌细胞系增殖的影响及与BRCA1基因的关系,并探讨是否P21/BRCA1信号通路参与了此过程。
实验材料与方法:
一、材料
鼠转基因卵巢癌细胞系T1(P53-/-,C-myc,K-ras)、T2(P53-/-,C-myc,Akt)和TBR6(BRCA1-/-,P53-/-,C-myc)
二、方法
(一)MTT法
检测姜黄素对鼠转基因卵巢癌细胞系作用不同浓度(20、40、80μmol/L)和不同时间(12h、24h、48h)T1、T2、TBR6三种细胞系增殖抑制情况,并比较T1、T2与TBR6抑制率之间的差异。
(二)RT-PCR法
检测姜黄素对鼠转基因细胞系作用不同浓度,(20、40、80μmol/L)和不同时间(12h、24h、48h)BRCA1基因和P21基因表达的情况。
实验结果:
1、姜黄素对鼠转基因卵巢癌细胞系T1(P53-/-,C-myc,K-ras)、T2(P53-/-,C-myc,Akt)、TBR6(BRCA1-/-,P53-/-,C-myc)均有明显抑制作用,且抑制率都随姜黄素作用时间和浓度的增加而逐渐增加,但T1,T2的抑制率明显高于TBR6,差异有统计学意义(P<0.05)。
2、BRCA1基因正常表达的T1、T2细胞系BRCA1mRNA在浓度40μmol/L的姜黄素不同时间12h、24h、48h作用下BRCA1mRNA表达逐渐增高,在不同浓度20、40、80μmol/L姜黄素作用24h后BRCA1mRNA表达也逐渐增高,差异有统计学意义,P<0.05。TBR6的BRCA1 mRNA表达缺失,说明卵巢癌转基因细胞系传代后基因特性表达稳定。
3、不同浓度姜黄素及不同作用时间后,T1(P53-/-,C-myc,K-ras),T2(P53-/-,C-myc,Akt),TBR6(BRCA1-/-,P53-/-,C-myc)中的P21 mRNA表达没有明显差异。
结论:
1、姜黄素对三种鼠卵巢癌转基因细胞系均有明显抑制作用,且随着作用时间和浓度的增加抑制率逐渐增加,但有BRCA1基因表达的细胞系对姜黄素作用更敏感。
2、姜黄素抑制鼠卵巢癌转基因细胞系增殖的作用机制之一是通过上调抑癌基因BRCA1的表达,从而抑制卵巢癌细胞增殖。
3、姜黄素对鼠转基因卵巢癌细胞系的抑制作用可能不是通过P21信号通路起作用的。