柑橘CRISPR遗传转化体系的探索及成花基因FT/TFL1的转移验证

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高等植物成花转变过程是物种繁殖延续的基础,受植物体内外信号共同调控。其中FT和TFL1是植物开花调控路径的重要基因,处于成花调控网络中的核心位置。本研究利用超表达和CRISPR基因敲除技术研究FT和TFL1基因在柑橘发育中的作用、使用嫁接手段验证成花相关基因的信号传递,以期改变柑橘长童期(juvenile period)现状、培育早花或晚花柑橘新种质。本研究得出的结果有:1.基于CRISPR/Cas9系统在草本植物中的研究规律,尝试建立在柑橘中的应用体系。借助农杆菌介导的枳上胚轴遗传转化过程,对转化再生过程进行优化。统计结果显示,调整无菌苗生长时间为42d、农杆菌液浓度OD600为0.8、转化促进物As浓度为30mg/L、外植体选用纵切的切割方法能有效提高抗性芽的再生率。2.利用超表达融合载体35S::Pt FT-EGFP对栽培型烟草进行遗传转化,获得超表达PtFT的烟草。种植PtFT和CiTFL1的转基因烟草T2代,发现PtFT能够明显促进烟草花期提前,同时促进植株侧枝发育,增加开花结实的数量。发现CiTFL1在枳不同组织中差异表达,且能够显著延迟栽培型烟草的开花时间。3.将野生型烟草(WT)嫁接到转基因烟草(PtFT、CiTFL1)砧木上,观察分析嫁接后烟草植株相关性状。未能发现转基因烟草砧木相应的早花或晚花表型传递。在嫁接口上0.5cm处接穗韧皮部没有检测到PtFT和CiTFL1 mRNA分子,来自柑橘属植物的外源FT和TFL1的mRNA,可能没有在草本植物烟草砧穗间移动。
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