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弓形虫病(Toxoplasmosis)是由专性细胞内刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)寄生于人和多种动物而引起的一种人兽共患病。它不仅给畜牧业带来了巨大的经济损失,同时造成孕妇的流产、死产等,可垂直传播给胎儿,致使胎儿的先天性疾病；也是造成艾滋病、恶性肿瘤等免疫缺陷患者死亡的重要病因。猫是弓形虫的终末宿主,因此针对猫弓形虫病疫苗的研发显得尤为重要。以病毒为载体的疫苗得到了良好的免疫效果,猫疱疹病毒Ⅰ型(Feline Herpesvirus type1,FHV-1)是一个很好的疫苗候选载体,TK基因是疱疹病毒增殖的非必需基因和主要的毒力基因,允许大容量的外源基因插入和表达。应用RT-PCR方法扩增弓形虫RH株SAG1和GRA4基因,构建了pMD-18T-SAG1/GRA4克隆载体、pCold Ⅲ-SAG1/GRA4原核表达载体、pBluescipt-TK转移载体及重组猫疱疹病毒穿梭质粒pB S-TK-SAG1/GRA4；将pColdⅢ-SAG1/GRA4原核表达载体转化至E.coli BL21感受态细胞,IPTG诱导,SDS-PAGE和Western-blot分析表达产物,并应用弗氏佐剂制备TgSAG1/GRA4蛋白亚单位疫苗,接种BALB/c小鼠制备抗rTgSAG1/GRA4蛋白的血清；利用脂质体介导转染法将pBS-TK-SAG1/GRA4重组质粒转染293T细胞,应用间接免疫荧光检测方法(IFAT)和Western blot技术检测基因TgSAG1/GRA4在293T细胞中的表达。结果显示,扩增的弓形虫RH株SAG1和GRA4基因长度分别为960bp和1038bp,成功构建了原核表达重组质粒pColdⅢ/SAG1/GRA4,表达的重组蛋白分子量依次为52ku.57ku,均具有较好反应原性；抗rTgSAG1/GRA4的小鼠血清多克隆抗体能识别出293T细胞内表达的35ku的SAG1和45ku的GRA4弓形虫蛋白。成功构建了具有良好反应原性的重组猫疱疹病毒穿梭质粒pBS-TK-SAG1/GRA4.