目的神经母细胞瘤是儿童常见的恶性肿瘤之一,侵袭程度高,为了研究神经母细胞瘤的侵袭特性,本实验室建立了神经母细胞瘤的原发瘤细胞系及神经母细胞瘤患者骨髓转移灶细胞系,为研究神经母细胞瘤的生物学特性提供一个良好模型。Boyden小室细胞培养模型具有综合判断肿瘤侵袭和转移的能力,侵袭小室呈桶状,底部装有聚碳酸醋微孔滤膜,滤膜表面涂有人工基底膜,侵袭小室和培养板共同构成细胞侵袭的上、下室。待测细胞种于上室,下室则是吸引细胞向下迁移的趋化液。有侵袭力的细胞首先粘附于人工基底膜表面,进而分泌基质金属蛋白酶消化降解人工基底膜,并通过迁移运动而穿过多孔滤膜,最后附着在滤膜另一面,穿过滤膜的细胞数目可反映该细胞的侵袭力。为了探讨Bovden小室法应用于神经母细胞瘤细胞的具体条件,我们检测了四种不同的神经母细胞瘤细胞系在不同细胞浓度和不同时间的侵袭细胞数,从中获得稳定的细胞浓度和侵袭时间,作为神经母细胞瘤体外侵袭性模型的标准化条件。方法将不同浓度(1.5×105、2.0×105、2.5×105、3.0×105/ml)的100ul四种神经母细胞瘤细胞系置入Boyden小室侵袭模型上室,分别培养24、36、48、60h,观察不同浓度的细胞在不同时间穿透基质胶聚碳酸酯膜的细胞数,用Boyden小室测定四种神经母细胞瘤细胞系细胞侵袭的能力。结果Boyden小室侵袭模型显示四种不同细胞系的侵袭能力不完全相同,在第24h透过ECM胶聚碳酸酯膜的细胞较少,随时间的延长而增多,在48h前后增幅最明显；同时随细胞浓度的增高,透过细胞数也增加,但细胞浓度大于2.5×105/ml时,透过ECM胶聚碳酸酯膜的细胞数变化不显著；在同一条件下,有骨髓转移能力的细胞系其侵袭能力大于无骨髓转移能力的细胞系。结论本实验成功建立了神经母细胞瘤细胞Boyden小室体外侵袭模型,该模型对体外神经母细胞瘤细胞迁移、侵袭能力的测定和研究及对探明神经母细胞瘤的转移机制和影响因素具有重要意义。目的侵袭和转移是恶性肿瘤的的重要特征,恶性肿瘤细胞特征性的转移能力和趋向性,是肿瘤细胞成功发生转移、转移灶形成的主要决定因素。近年来的研究结果显示,某些恶性肿瘤的转移表现出定向的器官特异性。趋化因子在肿瘤嗜器官转移中起了重要作用。趋化因子CXCL12与其特异性受体CXCR4所构成的CXCL12-CXCR4生物学轴在多种肿瘤的播散和器官特异性转移中发挥着重要的作用,神经母细胞瘤首先转移到骨髓,由于NB这种独特的转移规律和骨髓微环境中CXCL12的高含量以及CXCR4在神经母细胞瘤细胞的普遍表达,因此我们推测神经母细胞瘤是利用CXCR4介导的细胞反应,激活肿瘤细胞穿越血管及组织间质而发生浸润、转移,从而形成NB的骨髓特异性转移。本实验应用Boyden小室研究不同浓度的CXCL12诱导国人有骨髓转移神经母细胞瘤细胞系迁移和侵袭；再用CXCL12特异性受体拮抗剂AMD3100阻断该生物学轴,探讨CXCL12/CXCR4生物轴在NB细胞系迁移和侵袭、转移中的作用。方法用不同浓度的CXCL12 (30、100、300ng/ml)诱导国人有骨髓转移神经母细胞瘤细胞系迁移、侵袭；同时观察AMD3100对CXCL12诱导迁移、侵袭的干预作用。用Boyden小室法测定其迁移、侵袭能力,观察不同浓度之间神经母细胞瘤细胞系迁移、侵袭能力的差别。结果迁移侵袭实验证明：CXCL12能促进国人有骨髓转移神经母细胞瘤细胞系的迁移、侵袭能力,在一定范围内呈浓度依赖性,在100ng/ml CXCL12作用下其穿膜细胞数为最大值,AMD3100可抑制100ng/ml CXCL12对其的迁移和侵袭能力。结论CXCL12/CXCR4轴在神经母细胞瘤细胞迁移和侵袭过程中起着促进作用,AMD3100具有潜在的治疗作用。