【摘 要】
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金刚烷胺（Amantadine,AMD）是一种治疗人类流感病毒病、帕金森神经障碍性疾病的人工合成药物,尚未批准用于畜禽病毒病的防治。据官方通告显示,AMD广泛残留于鸡肉组织与鸡蛋中。人类长期接触或食用AMD会损害其呼吸、生殖以及神经系统。此外,AMD的滥用亦会增强流感病毒对其的耐药性、加大病毒变异的可能,降低疾病治疗的效果。因此,监测AMD在鸡肉组织、鸡蛋中的残留十分必要。AMD现有的检测方法以仪
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金刚烷胺（Amantadine,AMD）是一种治疗人类流感病毒病、帕金森神经障碍性疾病的人工合成药物,尚未批准用于畜禽病毒病的防治。据官方通告显示,AMD广泛残留于鸡肉组织与鸡蛋中。人类长期接触或食用AMD会损害其呼吸、生殖以及神经系统。此外,AMD的滥用亦会增强流感病毒对其的耐药性、加大病毒变异的可能,降低疾病治疗的效果。因此,监测AMD在鸡肉组织、鸡蛋中的残留十分必要。AMD现有的检测方法以仪器检测法及免疫检测法为主。仪器检测法前处理复杂、不适用于现场检测,免疫检测法简单快速。在免疫检测法中,免疫层析技术是当今的主流,磁性纳米粒子与其的结合更是近年研究的热点。磁免疫层析试纸条具有信号穿透力强、生物背景干扰小及灵敏度高等特点。因此,建立适用于鸡肉组织、鸡蛋的AMD磁免疫层析试纸条将为市场提供更加简洁、高效、灵敏的检测方法,具有重要的应用价值。本研究的主要内容包括以下几个方面:1.采用溶剂热法合成磁性纳米粒子,利用外界磁场、扫描电子显微镜、纳米粒度/Zeta分析仪以及红外光谱仪对其磁性、形貌、尺寸、表面电位以及组成元素进行表征。结果表明该方法可以一步合成粒径均一、分散性良好且表面带有羧基的磁性纳米粒子。2.筛选磁性纳米粒子与AMD单克隆抗体偶联条件,制备磁标抗体。结果表明偶联液为去离子水、复溶液为0.5%BSA、磁性纳米粒子与抗体比例为100μg:2μg、偶联封闭时间均为30 min、以真空冷冻干燥法保存磁标抗体时,磁标抗体在试纸条NC膜上层析最顺畅。3.对影响磁免疫层析方法灵敏度的因素进行优化。结果表明,硝酸纤维素膜型号为PALL VIV9025 100R、层析液为0.01 mol/L PBS（p H7.4）、二抗浓度（C线）为0.7 mg/m L、抗原浓度（T线）为0.05 mg/m L、磁标抗体与待测液反应时间为2 min、试纸条检测时间为7 min时,磁免疫层析方法灵敏度最高。4.稳定性试验中,磁免疫层析试纸条与磁标抗体微孔在25℃下可保存60 d,在50℃加速老化试验中可保存30 d,且灵敏度不发生变化。根据阿伦尼乌斯方程推算,二者保质期至少为1年。5.在磁免疫层析方法的应用中,AMD在鸡肉、鸡蛋样品的定性检测限（LOD）均为0.5μg/kg。取不同来源的鸡肉、鸡蛋的空白样品、加标样品各20份,检测结果正确率100%。6.按照1×LOD,2×LOD,4×LOD向鸡肉、鸡蛋空白样品中添加AMD标准溶液。结果表明,检测相同添加浓度样品时T/C值变异系数均在10%以内,满足快速检测试纸条要求。7.在方法对比考核中,按100 mg/kg、50 mg/kg、25 mg/kg向白羽肉鸡饲喂AMD,取其鸡肝、鸡肉检测。磁免疫层析方法与高效液相色谱-串联质谱法检测结果一致,说明本研究建立的磁免疫层析方法可作为实际样品中AMD残留检测的可靠工具。本研究采用溶剂热法合成磁性纳米粒子,制备磁标抗体,优化条件,首次建立快速检测鸡肉组织、鸡蛋中AMD残留的高灵敏磁免疫层析方法,弥补了现有检测技术的不足,为未来磁免疫层析方法的建立提供参考,具有重要的学术意义和应用价值。
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