纳米级脂质超声微泡造影剂在超声显像及介导基因转染中的应用研究

来源 :华中科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hiwola
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第一部分超声微泡破裂法联合阳离子脂质体介导基因转染的实验研究目的探讨超声微泡破裂法联合阳离子脂质体(cationic liposome,CL)介导绿色荧光蛋白质粒在肝癌细胞(HepG2)基因转染的可行性,并探索最佳转染条件。方法依次采用培养液中是否含有血清和不同的CL浓度、不同超声辐照时间点、不同纳米级脂质微泡造影剂(nano-liposomal bubble, NB)浓度等处理因素进行细胞基因转染。荧光显微镜和流式细胞仪检测基因转染效率,CCK-8法检测细胞活性,以获得优化的转染参数。结果血清能降低CL的细胞毒性,但对基因转染效率无明显影响,CL与质粒DNA质量比为4:1时可以达到相对高效低毒的转染效果,细胞转染率和存活率分别为(17.71±0.79)%和(91.28±0.76)%。CL联合1小时时间点辐照超声可以提高转染率至(24.85±0.78)%(P<0.01),加入10%的NB可进一步提高转染率至(32.47±4.01)%(P<0.05)。结论超声微泡破裂法可以有效增强阳离子脂质体介导的基因转染,联合应用为基因治疗提供了新思路。第二部分纳米级脂质超声微泡造影剂制备工艺优化及其性质研究目的比较自制纳米级脂质超声微泡造影剂(nano-liposomal bubble, NB)和商用超声微泡造影剂声诺维(SonoVue)在体内显像效果和介导细胞基因转染的差异。方法使用两种不同的方法制备NBⅠ和NBⅡ。观察SonoVue、NBⅠ和NBⅡ对兔正常肝脏和VX2肝肿瘤的超声造影显像效果差异。并使用上述三种微泡联合超声辐照来介导pEGFP质粒转染HepG2细胞,荧光显微镜和流式细胞仪检测细胞转染率,CCK-8法检测细胞毒性。结果NBⅠ、NBⅡ在兔正常肝脏实质的超声造影显影时间均长于SonoVue(P<0.05),且NBⅡ显影强度最高(P <0.05)。三种微泡在兔VX2肝肿瘤的显影效果相似,均为动脉相肿瘤环状高增强,实质相肿瘤无增强,与周围肝脏实质的高增强呈明显对比。浓度为10%的NBⅡ联合超声辐照介导细胞基因转染的效率高于其余组(P <0.01),达到(12.54±2.13)%。结论NBⅡ制备方法优良,不仅在体内具有良好的显像效果,而且其介导基因转染的效率高,因此在携带基因和药物治疗方面具有广阔的发展前景。
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