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本文在第一章综述了气滞血瘀证的发病机理和原发性痛经的研究进展,探讨了香附四物汤治疗气滞血瘀证痛经的中医理论指导和临床应用,还总结了从1965年到现在人们对木香的化学研究概况。
在第二章的实验部分,对香附四物汤的汤剂用D101大孔吸附树脂和纤维膜进行分离,制得19个部位(XF-1~XF-19),并对它们进行了活性评价。
1.抑制小鼠离体子宫平滑肌收缩运动的活性评价评价了香附四物汤各分离部位抑制小鼠离体子宫平滑肌收缩运动的活性。实验前皮下注射苯甲酸雌二醇造成小鼠人工动情期以提高子宫对药物的敏感性。取卵巢及子宫分叉处之间的中段子宫,将肌条安置在恒温平滑肌槽中,每个肌槽中分别盛有Locke's液。待肌条的自发活动平稳后加入待试样品,观察其对小鼠离体子宫平滑肌条收缩活动的影响。记录给药前后子宫平滑肌条的收缩波频率、平均振幅和肌张力,并计算样品对这三个指标的抑制率。本文用3个评价指标分析香附四物汤各部位抑制离体子宫收缩的实验结果表明:XF-2、XF-5和XF-13有显著抑制离体子宫收缩的活性。其中XF-19在小剂量时,表现出对离体子宫收缩频率显著的抑制作用,而对离体子宫收缩幅度和肌张力则表现出显著的兴奋活性,XF-19在大剂量时对子宫收缩频率的抑制活性降低,而对离体子宫收缩幅度和肌张力则表现出抑制的趋势,这提示着XF-19可能存在着双向调节作用。
2.抑制血小板聚集的活性评价评价了香附四物汤各部位对血小板聚集的抑制活性,以生理盐水作为空白对照,以川芎嗪为阳性对照,观察香附四物汤各部位对ADP诱导家兔血小板聚集的抑制作用。实验结果表明,DMSO溶剂对实验未见明显影响,香附四物汤经D101大孔吸附树脂分离得到的10~30%乙醇洗脱部位(即XF-8~XF-10)均显示出对ADP诱导的血小板聚集有显著的抑制作用(P<0.05),其中XF-8的P<0.005,表现出显著的抑制血小板聚集活性,而其他部位在100μg/ml的剂量下未见明显的抑制活性(P>0。05)。
3.XF-8一XF-10部位的HPLC分析用HPLC分析了XF-8~XF-10部位,并且将其与单味对照药材作比较,实验结果表明,XF-9中检测到的主要成分在XF-8中也存在,XF-10中的化学成分与XF-8和XF-9相比有较大差异,XF-8中的主要成分来源于延胡索、川芎和木香,XF-9中的主要成分来源于延胡索、木香。所以香附四物汤中抑制ADP诱导的血小板聚集的活性成分来源于延胡索,川芎,木香中极性较大的化学成分。
4.生物碱类成分的HPLC-ESI-QTOF/MS分析采用液质联用技术(HPLC-ESI-QTOF/MS)分析鉴定了XF-8~16中生物碱类化学成分。根据所测得的各个组分分子离子峰的m/z值,通过查阅文献,并与延胡索单味药材比较,巴马丁,非洲防己碱在XF-12~16部位均出现,四氢非洲防己碱,脱氢紫堇碱在XF-12~15部位出现,原托品碱在XF-12~14部位出现,延胡索乙素、紫堇碱和小檗碱只在XF-12部位出现,在XF-8~11部位均未出现此类生物碱成分。在XF-12部位出现的生物碱成分最多,从XF-12到XF-16部位,生物碱成分逐渐减少,到XF-16部位时最少。抑制离体子宫收缩实验的研究结果表明,XF-12和13有显著抑制离体子宫收缩的活性,这就提示香附四物汤中抑制离体子宫收缩的活性物质来源于延胡索中的小蘖碱类生物碱。
5.木香挥发油的GC-MS分析采用水蒸气蒸馏法提取木香挥发油,采用毛细管气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术对挥发油中化学成分进行分析鉴定,鉴定出了木香挥发油中59个分,其主要成分为去氢木香内酯、木香烃内酯、雪松烯醇、α-榄香烯、环辛二烯、桉叶(油)醇、α-芹子烯、丁子香烯、长松叶烯、7-甲基-3,4辛二烯等,占挥发油总量的72.91%。
6.木香化学成分的分离与结构鉴定利用硅胶柱色谱柱层析和重结晶等方法从云木香根的60%乙醇提取物中分离得到9个化合物,通过1H-NMR、13C-NMR、2DNMR和MS鉴定其结构,分别新木香烯酸(Neolappaic acid),Santamarine、β-cyclocostunolide、4α-hydroxy-4β-methyldihydrocostol,脱氢木香内酯(dehydrocostus lactone)、β-谷甾醇(β-sitosterol)、胡萝卜苷(daucosterol)和5-羟甲基糠醛(5-hydroxy-methyl-furaldehyde),其中新木香烯酸(Neolappaic acid)为新化合物。