慢性根尖周炎(chronic apical periodontitis，CAP)是一种以炎症性肉芽组织形成和骨质破坏为主要病理特征的疾病，基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMPs)在慢性根尖周炎的炎症发展和骨病损扩散中发挥重要作用。MMP-13属于MMPs家族，是一种间质胶原酶，可由成骨细胞、巨噬细胞、浆细胞分泌，在慢性根尖周炎的骨吸收中起着关键作用，且与根尖周肉芽肿向根尖囊肿的转化关系密切。牙髓卟啉单胞菌（Porhyromonas endodontalis，P.e）的脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）是根尖周炎症的强刺激因素，我们的前期研究已证明P.e LPS诱导成骨细胞产生白细胞介素(interleukin，IL)-1、IL-6、IL-23、巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor，M-CSF)和Wnt5a等多种炎症因子，其中IL-6、M-CSF和Wnt5a的表达与核因子κB(nuclear factor-κB，NF-κB)信号通路有关，我们还证明了P.e LPS刺激成骨细胞后有效地激活了NF-κB信号通路。然而，关于P.e LPS诱导成骨细胞中MMP-13表达的情况及是否与NF-κB信号通路有关未见报道。　　SIRT1是广泛存在于哺乳动物细胞内的一种蛋白，是沉默信息调节因子(sirtuin，SIRT)蛋白质家族的一员，它是Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶，在脂代谢、糖代谢以及调节胰岛素分泌中发挥重要作用。近几年，学者们开始探索SIRT1在炎症反应中的作用，发现SIRT1在各种组织细胞中发挥了良好的抗炎作用。SIRT1主要的抗炎机制之一就是它能通过去乙酰化作用于NF-κB的p65亚基，抑制NF-κB下游靶基因的转录，进而减少IL-1、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha，TNF-α)等炎症因子的产生。然而，在成骨细胞中，SIRT1是否参与调控P.e LPS诱导的慢性根尖周炎相关炎症因子的表达以及SIRT1是否参与调控P.e LPS激活的NF-κB信号通路仍不清楚。　　目的:　　观察P.e LPS对小鼠成骨细胞MC3T3-E1细胞MMP-13mRNA表达和MMP-13蛋白分泌水平的影响，以及NF-κB信号通路在P.e LPS诱导小鼠成骨细胞MMP-13表达中的作用;探索P.e LPS作用的小鼠成骨细胞中SIRT1蛋白的变化及SIRT1是否参与了MMP-13表达的调控，以及SIRT1蛋白对NF-κB信号通路的调控作用。以期为研究慢性根尖周炎根尖区骨破坏的发生发展机制提供依据，同时为炎症性骨破坏寻找新的治疗靶点。　　方法:　　1、培养(P.e)，提取LPS，并鉴定。　　2、培养MC3T3-E1细胞。　　3、运用实时逆转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription-polymerase chain reaction，real-time PCR)检测不同浓度、不同作用时间的P.e LPS刺激MC3T3-E1细胞后MMP-13在mRNA水平表达的变化;分别用Bay11-7082(NF-κB抑制剂)、白藜芦醇(resveratrol，RES)（SIRT1激动剂）、EX-527（SIRT1抑制剂）预处理细胞后，再用P.e LPS刺激，检测MMP-13mRNA表达的变化。　　4、运用酶联免疫吸附试验（enzyme-like immunosorbent assay，ELISA）检测不同作用时间的P.e LPS刺激MC3T3-E1细胞后MMP-13蛋白分泌水平的变化;检测分别用Bay11-7082、白藜芦醇、EX-527预处理细胞后，再用P.e LPS刺激，MMP-13蛋白分泌水平的变化。　　5、运用蛋白质印迹(Western blot)技术，检测P.e LPS刺激MC3T3-E1细胞0-48h后SIRT1蛋白表达的变化;分别用白藜芦醇、EX-527预处理细胞后，再用P.e LPS刺激细胞，SIRT1蛋白表达的变化以及NF-κB乙酰化水平的变化。　　6、用双萤光素酶报告基因(Dual luciferase reporter gene)系统检测白藜芦醇、EX-527对MC3T3-E1细胞NF-κB转录活性的影响。　　7、用染色质免疫沉淀(Chromatin Immunoprecipitation，ChIP)的方法，检测P.e LPS是否能促使NF-κBp65亚基与MMP-13启动子结合，同时确定MC3T3-E1细胞中MMP-13启动子上的NF-κBp65亚基的结合位点;分别用白藜芦醇、EX-527预处理细胞后，再用P.e LPS刺激细胞，观察白藜芦醇和EX-527对NF-κBp65亚基与MMP-13启动子结合的影响。　　结果:　　1、P.e LPS诱导MC3T3-E1细胞MMP-13的表达增多，且随着P.e LPS刺激强度的增大，MMP-13基因的转录水平和MMP-13蛋白分泌水平也增加。　　2、NF-κB以正调节方式参与了P.e LPS诱导MC3T3-E1细胞表达MMP-13的过程。(1)用NF-κB抑制剂BAY11-7028预处理MC3T3-E1细胞后，P.e LPS诱导的MMP-13mRNA表达减少，且MMP-13蛋白分泌减少;(2)20μg/ml P.e LPS刺激MC3T3-E1细胞1h，促使NF-κBp65亚基绑定于与MMP-13启动子的-400～-200bp区域。　　3、SIRT1蛋白以负调节方式参与了P.e LPS诱导MC3T3-E1细胞表达MMP-13的过程。(1)P.e LPS刺激MC3T3-E1细胞引起细胞内SIRT1蛋白水平降低，且呈现时间依赖性;白藜芦醇（SIRT1激动剂）预处理MC3T3-E1细胞，使细胞内SIRT1蛋白增加，EX-527(SIRT1抑制剂)预处理使SIRT1蛋白减少;(2)用SIRT1激动剂白藜芦醇预处理MC3T3-E1细胞后，P.e LPS诱导的MMP-13mRNA表达和蛋白分泌水平均减少，而SIRT1抑制剂EX-527则作用相反。　　4、SIRT1抑制了P.e LPS刺激的MC3T3-E1细胞中NF-κB的转录活性，抑制了NF-κBp65与MMP-13启动子的结合，并降低了NF-κBp65亚单位的乙酰化水平。(1)白藜芦醇使P.e LPS诱导的MC3T3-E1细胞中NF-κB转录活性降低，EX-527使NF-κB转录活性升高;(2)白藜芦醇抑制了P.e LPS诱导的MC3T3-E1细胞中NF-κBp65与MMP-13启动子的结合，EX-527则促进了NF-κBp65与MMP-13启动子的结合;(3)白藜芦醇使P.e LPS诱导的MC3T3-E1细胞中乙酰化的NF-κBp65减少，EX-527使乙酰化的NF-κBp65增多。　　结论:　　1、P.e LPS诱导成骨细胞MMP-13的基因表达和蛋白分泌增多。　　2、成骨细胞中，SIRT1和NF-κB参与P.e LPS诱导MMP-13表达的过程。　　3、SIRT1蛋白通过抑制NF-κB信号通路下调P.e LPS诱导的成骨细胞MMP-13的表达。