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[目的] 1.监测大鼠坐骨神经损伤后与再生时外周血T淋巴细胞亚群的变化及损伤局部IgG的聚集和MHCⅡ(Major histocompatibility complex,主要组织相容性复合体)的表达情况。 2.研究使用FK506对上述免疫学指标变化的影响,对FK506的免疫抑制作用与周围神经再生之间的关系进行初步的探讨。 [方法] 1.在手术显微镜下建立SD(Sprague-Dawley)大鼠坐骨神经横断伤及原位缝合模型:麻醉下大鼠俯卧位固定,作右侧臀部及大腿后侧纵直切口长约2cm,显露坐骨神经。坐骨大孔下方1cm处切断坐骨神经后原位一期10/0单丝尼龙线间断缝合3~4针,关闭切口。 2.健康成年SD大鼠5只构成正常对照组,切取右侧手术部位坐骨神经约8mm长(各实验组吻合口远近侧各4mm),纵行冰冻切片10μm厚,制片,以间接免疫荧光染色法检测IgG,间接免疫酶染色法检测MHCⅡ,检测正常神经组织IgG和MHCⅡ的表达情况;随后从心脏采血2~3ml,以微量全血直接免疫荧光流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群,获得正常值。 3.健康SD大鼠60只,雌雄不限,体重200~250g,行坐骨神经横断及原位缝合术,术后随机分成FK506组、CsA(Cyclosporine A,环孢霉素A)组和安慰剂组3组,每组20只,分别以FK506 1mg/kg·d-1、CsAlomg/kg·d-1或相当体积的生理盐水灌胃,术后第1、2、3、4周各取5只取材,分别检测坐骨神经IgG、MHCⅡ表达情况和外周血T淋巴细胞亚群,比较术前与术后及不同处理组之间的差别。 4.健康SD大鼠15只,雌雄不限,体重200~250g,制作同上模型,随机分成3组,每组5只,分别以FK506 1mg/kg·d-1、CsA10mg/kg·d-1或相当体积的生理盐水灌胃。术后每两周进行一次步行实验获取足印计算坐骨神经功能指数(sciatic function index,SFI);术后3月取材,作神经组织髓鞘染色和HE(hematoxyhn and cosin,苏木素和伊红)染色,观察组织学情况并作图像分析,测量髓鞘厚度和轴突面积并计数有髓神经纤维,评价损伤神经再生情况。 【结果】 1.各鼠术后存活良好,无l例死亡,无伤口感染,有3鼠出现右足第3、4、5趾坏死缺失,周围红肿。每组取材时见神经吻合处无撕裂,外观光滑。 2.正常对照组坐骨神经IgG和MHcll免疫组化染色显示神经外膜有浅的着色;外周血T淋巴细胞亚群检测结果(%)en3+59.59土6.23、en3十CD4+39.71士5.35、eD3十eDS+20.45士1.77,两者的比值为1.94士0.200 3.与正常对照组相比,安慰剂组IgG和MHCll免疫组化染色显示外膜较强的着色及神经组织的散在着色,术后第2周时最明显;CD3+CD4+细胞比例增加,CD4+/ CDS+比值增大,术后两周时达到高峰。 4.与安慰剂对照组相比,FK506组和CsA组免疫组化染色较浅;各亚群淋巴细胞在整个用药期间比例降低,CD4+/C DS+比值减小。 5.动态测定SFI数据显示FK506组与安慰剂对照组和CsA组相比功能恢复好,如术后90天FKSO6组SFI为一42.14士1.63,安慰剂对照组为一69.58士2.11,CSA组为一65.66士2.24。 6.术后90天周围神经再生组织学检查和图像分析,显示FK506组有髓神经纤维轴突再生数目为3731士406.23条/IlullZ,轴突直径为3.92士0.46协m,髓鞘厚度为1.47士0.12林m,均优于安慰剂对照组和csA组,提示FK506组周围神经再生状况较好。 【结论】 1.周围神经损伤能引发全身和神经局部的免疫反应; 2.FK506和CsA能抑制这种反应,可能对周围神经损伤后再生有 益; 3.除了免疫抑制作用外,FK506有其它机制(神经营养作用)促 进损伤神经再生。