【摘 要】
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目的：
凋亡抑制因子6(Apoptosis Inhibitor6,Api6),又称作AIM和Spα,是清道夫受体富含半胱氨酸残基家族新成员。Api6在免疫调节和肿瘤发生中发挥了重要作用,其抑制巨噬细
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目的：
凋亡抑制因子6(Apoptosis Inhibitor6,Api6),又称作AIM和Spα,是清道夫受体富含半胱氨酸残基家族新成员。Api6在免疫调节和肿瘤发生中发挥了重要作用,其抑制巨噬细胞凋亡、从而参与AS的病变发展的作用己得到人们的认识。但是作为清道夫受体,Api6的在脂质代谢中起到的作用还不为人们所熟知。本研究通过建立过表达Api6的RAW264.7小鼠巨噬细胞株,探讨在炎症和高脂状态下Api6对小鼠巨噬细胞胆固醇转运及相关基因表达的影响。
材料和方法：
将体外扩增的Api6 cDNA全长片段插入载体PEGFP-N1中,构建表达Api6基因的质粒PEGFP-N1/Api6,酶切及测序鉴定。
体外培养PAW264.7小鼠巨噬细胞,瞬时转染PEGFP-N1/Api6质粒,然后采用LPS和LDL刺激细胞建立炎症和高脂模型,油红O染色观察细胞内脂质蓄积的情况;RT-PCR检测在不同处理条件下细胞内胆固醇转运相关基因表达的情况。
结果：
1.成功构建质粒PEGFP-N1/Api6:Western Blot和RT-PCR实验证实:与空质粒转染组相比,RAW264.7细胞瞬时转染质粒PEGFP-N1/Api6后,细胞内Api6蛋白表达增加,mRNA水平表达上调13倍。
2.油红O实验结果显示:单纯高脂以及炎症和高脂同时存在可以导致RAW264.7细胞内明显的脂质蓄积。但与空质粒转染组相比,瞬时转染PEGFP-N1/Api6的RAW264.7细胞内脂质蓄积更为明显。
3.RT-PCR实验结果显示:与空质粒转染组相比;过表达Api6对炎症和高脂状态下SRA和ABCG1的表达无明显影响,但过表达Api6会影响高脂负荷下LDLR的负反馈调节,清道夫受体CD36和胆固醇清除相关受体ABCA1的表达,从而导致细胞内胆固醇蓄积增加。
结论：
炎症和高脂状态下,过表达Api6可以增加RAW264.7细胞内胆固醇的蓄积,其机制可能与Api6抑制LDLR的负反馈调节,上调清道夫受体CD36表达,以及下调胆固醇清除相关受体ABCAl的表达有关。
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