论文部分内容阅读
目的:肝癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）是全世界范围内与癌症相关的最常见的死亡原因之一。通常情况下,肝癌患者早期没有明显症状,被诊断时多已发展到晚期阶段,已不适合手术治疗。因此,晚期肝癌治疗方法的选择受到极大的限制。此外,由于转移率及术后复发率较高,肝癌患者的五年存活率不能令人满意。因此,开发新的抗肝癌药物具有重要的意义。萘酰亚胺类化合物作为DNA嵌入剂,具有良好的抗肿瘤活性。天然多胺或合成的多胺类似物是一种有效利用肿瘤细胞膜上多胺转运体的靶向载体,具有提高化合物靶向性和生物活性的能力。将萘酰亚胺与多胺缀合,可增加萘酰亚胺的水溶性和抗肿瘤活性,并使之具有较高的肿瘤细胞选择性。本文对新型萘酰亚胺-多胺缀合物SLP4的抗肝癌作用及其分子机制进行研究。方法:1、在细胞及动物水平,评价SLP4对肝癌细胞增殖的影响:采用MTT法,在指定时间点（24 h和48 h）测定SLP4对肝癌细胞（SMMC-7721和Hep G2细胞）增殖的抑制作用,并计算IC50值;使用流式细胞仪检测SLP4对肝癌细胞周期的影响;使用AO/EB和Rh123/Hoechst 33342染色剂对上述细胞进行染色,并利用高内涵活细胞成像系统（HCS）考察SLP4对肝癌细胞凋亡的影响;使用AnnexinV/PI对细胞进行染色,并用流式细胞仪测定肝癌细胞的凋亡率;采用Western blot考察SLP4对细胞周期及凋亡相关蛋白表达的影响;采用高效液相色谱法（HPLC）测定SLP4对肝癌细胞内多胺含量的影响,并考察多胺含量的改变对肝癌细胞增殖的影响;基于H22小鼠腋下移植肝癌模型,评价SLP4对肝癌实体瘤生长的影响。2、在细胞和动物水平,考察SLP4对肝癌迁移和转移的影响:采用细胞划痕法和Transwell小室实验,考察SLP4对肝癌细胞迁移的影响;采用Western blot法检测SLP4对迁移相关蛋白表达的影响;基于H22小鼠肝癌肺转移模型,评价SLP4对小鼠肿瘤肺转移以及小鼠生存时间的影响。结果:1、SLP4抑制肝癌细胞的增殖:作用24 h后,SLP4抑制SMMC-7721、Hep G2细胞增殖,IC50值分别为（17.5±0.95）μM、（19.4±1.35）μM;48 h后,IC50值分别为（8.56±0.86）μM和（9.88±1.21）μM;SLP4将SMMC-7721和Hep G2细胞周期阻滞在G2/M期;SLP4同时诱导SMMC-7721和Hep G2细胞发生凋亡,凋亡率分别为45.3%和46.8%;Western blot结果显示SLP4上调SMMC-7721和Hep G2细胞内p53、p21、CyclinB1、p-Cdc2、Bax、c-PARP1、SSAT的蛋白表达,下调Cdc2、Bcl-2、CyclinD1的蛋白表达;HPLC检测结果显示SLP4可以降低SMMC-7721和Hep G2细胞内多胺的含量;此外,SLP4可显著抑制荷H22肝癌细胞小鼠实体瘤的生长,抑瘤率为58.63%。2、SLP4抑制肝癌的迁移和转移:细胞划痕法和Transwell小室实验结果显示SLP4抑制肝癌SMMC-7721和Hep G2细胞的迁移;Western blot检测结果显示SLP4下调SMMC-7721和Hep G2细胞内β-catenin、MMP7和N-cadherin的蛋白表达,上调E-cadherin的蛋白表达;动物实验结果显示SLP4可以抑制荷H22肝癌细胞小鼠的肺转移,抑制转移率为79.73%,并能延长其中位生存时间。结论:SLP4通过激活p53蛋白介导的信号通路,将SMMC-7721和Hep G2细胞阻滞于G2/M期,并能诱导细胞凋亡;此外,SLP4通过上调SSAT表达,引起细胞内多胺含量降低,继而发挥抑制肿瘤细胞增殖、迁移及转移的作用。