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目的:胰腺癌是常见的消化道恶性肿瘤,预后差,近年来发病率呈现升高趋势。由于胰腺癌的早期症状不明显,并且容易入侵血管发生远处转移,所以80%-85%的病人在诊断为胰腺癌时已经不可能通过手术切除来治疗。仅有的15-20%具有手术机会的患者在经历根治性切除术之后也具有很高的复发率。目前胰腺癌转移和复发的相关机制还没有明确,人们也一直在寻找相应的有效治疗靶点。之前的研究表明含DEP结构域蛋白1B(DEPDC1B)在多种肿瘤的进展过程中有着不容忽视的作用,但是DEPDC1B在胰腺癌中扮演着什么样的角色,至今还没有相关的研究报导。我们的研究旨在探索DEPDC1B在胰腺癌迁移、侵袭过程中发挥的作用及其相关机制,寻找新型有前景的抑制胰腺癌转移复发的分子靶点及潜在的靶向治疗药物。方法:western blotting实验和real-time PCR实验分析五种胰腺癌细胞系和正常胰腺导管细胞系中DEPDC1B基因的表达水平;通过si RNA或慢病毒转染胰腺癌细胞,下调或上调细胞中DEPDC1B基因的表达;划痕实验和transwell迁移及侵袭实验分析实验组和对照组胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力;western blotting实验分析实验组和对照组胰腺癌细胞上皮间充质转化(EMT)过程中相关蛋白的表达水平;免疫共沉淀实验分析在胰腺癌细胞中DEPDC1B与Rac1是否可以直接相互作用;western blotting实验分析实验组和对照组Rac1/PAK1-LIMK1-Cofilin1通路中相关蛋白的表达水平。选择EHop-016作为Rac1的抑制剂,采用划痕实验和transwell迁移及侵袭实验分析对照组、上调DEPDC1B组以及上调DEPDC1B联合EHop-016组胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力,western blotting实验分析以上三组胰腺癌细胞EMT和Rac1/PAK1-LIMK1-Cofilin1通路中相关蛋白的表达水平。结果:1.与正常胰腺细胞系相比,DEPDC1B基因在胰腺癌细胞系中表达水平显著升高。2.DEPDC1B调节胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力。划痕实验显示,与对照组相比,敲除DEPDC1B组的细胞划痕愈合率降低;transwell迁移及侵袭实验显示,与对照组相比,敲除DEPDC1B组的细胞发生迁移和侵袭的数量减少;western blotting实验显示,与对照组相比,敲除DEPDC1B组的细胞中E-Cadherin表达水平升高,N-Cadherin、Vimentin、TWIST1表达水平下降。在胰腺癌细胞中过表达DEPDC1B时结果则相反。3.DEPDC1B与Rac1相互作用,调节PAK1-LIMK1-Cofilin1信号通路。免疫共沉淀实验显示在胰腺癌细胞中DEPDC1B与Rac1可以直接相互作用;western blotting实验显示,与对照组相比,敲除DEPDC1B组的细胞中GTP-Rac1、P-PAK1、P-LIMK1、P-confilin1蛋白表达水平下降,但Rac1、PAK1、LIMK1、Cofilin1总蛋白表达水平没有变化。在胰腺癌细胞中过表达DEPDC1B时结果则相反。4.Rac1抑制剂EHop-016抑制Rac1/PAK1-LIMK1-Cofilin1信号通路,并且逆转DEPDC1B诱导的胰腺癌细胞迁移与侵袭。Western blotting实验显示,与过表达DEPDC1B组相比,联合应用EHop-016组的细胞中GTP-Rac1、P-PAK1、P-LIMK1、P-Cofilin1蛋白表达水平降低,但Rac1、PAK1、LIMK1、Cofilin1的总蛋白表达水平没有变化。划痕实验显示,与过表达DEPDC1B组相比,联合应用EHop-016组的细胞划痕愈合率降低;transwell迁移及侵袭实验显示,与过表达DEPDC1B组相比,联合应用EHop-016组的细胞发生迁移和侵袭的数量减少;western blotting实验显示,与过表达DEPDC1B组相比,联合应用EHop-016组的细胞E-Cadherin表达水平升高,N-Cadherin、Vimentin、TWIST1表达水平降低。5.Rac1抑制剂EHop-016逆转DEPDC1B诱导的小鼠胰腺癌肝转移。胰腺癌肝转移裸鼠模型显示,过表达DEPDC1B组中具有肝转移性结节的小鼠数量高于对照组中的小鼠数量,但在接受EHop-016治疗的过表达DEPDC1B组中,没有小鼠出现肝转移性结节。结论:1.DEPDC1B基因在胰腺癌细胞系中高表达。2.DEPDC1B基因增强胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力,并促进上皮间充质转化过程。3.DEPDC1B基因与Rac1基因相互作用,调节PAK1-LIMK1-Cofilin1信号通路。4.Rac1小分子抑制剂EHop-016可以抑制Rac1/PAK1-LIMK1-Cofilin1信号通路,并且能够逆转DEPDC1B基因诱导的胰腺癌细胞迁移与侵袭。5.EHop-016逆转DEPDC1B诱导的小鼠胰腺癌肝转移。因此,DEPDC1B基因可以作为新型有前景的抑制胰腺癌转移复发的分子靶点,EHop-016也是该基因下游发挥主导作用通路潜在的靶向治疗药物。