三疣梭子蟹卵巢发育过程中FAMeT和MIH基因表达变化

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为了研究法尼酸甲基转移酶(FAMeT)和蜕皮抑制激素(MIH)在甲壳动物卵巢发育中的作用,本文首先采用反转录PCR(RT-PCR)和cDNA末端快速扩增技术(RACE)克隆得到了三疣梭子蟹FAMeT的全长cDNA序列(GenBank登录号:KC192659),它包括一个201bp的5’非编码区、一个318bp的3’非编码区,和一个825bp的开放阅读框(ORF),编码274个氨基酸;推导的氨基酸序列与已公布的其他甲壳动物FAMeT进行比对,发现一致性达75%-97%,其中与远海梭子蟹FAMeT的一致性最高;而且该氨基酸序列由两个CF(CPAMD8/FAMeT)区域组成,这两个CF区域是FAMeT的标志,在所有甲壳动物的FAMeT里均有发现,因此推导的氨基酸序列是三疣梭子蟹FAMeT基因。组织表达差异分析发现FAMeT在三疣梭子蟹的各个组织里均有表达且在胸神经节(Taoracicganglia)里表达最强;在三疣梭子蟹蜕皮过程中,大颚器FAMeT在D1期表达最强,然后逐渐下降至D4最低。该结果表明FAMeT在三疣梭子蟹各项生理活动调控中起着重要的作用。运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)的方法分析了卵黄蛋白原(Vg)、FAMeT和MIH在三疣梭子蟹卵巢发育过程中的基因表达变化,结果表明:卵巢中Vg基因表达量在I期和II期很低,在III期迅速升高,至IV期达到最高,V期略微下降,雌蟹排卵后(VI期)回到一个较低的水平;Vg基因在肝胰腺中的表达变化与之类似,但表达量在V期继续上升至最高;三疣梭子蟹MIH基因在卵巢发育的I期表达量最高,随着卵巢的发育,MIH基因的表达水平逐渐下降,在IV期和V期降到最低,雌蟹排卵后(VI期)MIH基因表达量迅速回到一个较高的水平,这说明MIH基因表达水平与三疣梭子蟹卵巢发育负相关,MIH可能具有抑制性腺发育的功能;大颚器FAMeT在卵巢发育的II期表达最强,显著高于其他各期,III期到V期,FAMeT基因的表达量逐渐上升,这说明FAMeT在三疣梭子蟹卵巢发育调控中起着重要的作用。
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