【摘 要】
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目的:利用镉中毒机制作用于小鼠睾丸间质细胞和小鼠睾丸组织,观察生姜粉对镉致雄性生殖系统损伤的保护机制。方法:通过体内和体外实验,利用免疫组化、HE染色、免疫印迹等检测技术,观测睾丸形态学结构改变、睾丸间质细胞中酶的表达以及凋亡相关因子的表达。对促凋亡因子Caspase-9、RBM10、CD44、抑制凋亡因子BCL-2、以及与参与细胞活性、分化黏附、迁移的因子17α羟化酶、eNOS和LHR在生姜粉作
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目的:利用镉中毒机制作用于小鼠睾丸间质细胞和小鼠睾丸组织,观察生姜粉对镉致雄性生殖系统损伤的保护机制。方法:通过体内和体外实验,利用免疫组化、HE染色、免疫印迹等检测技术,观测睾丸形态学结构改变、睾丸间质细胞中酶的表达以及凋亡相关因子的表达。对促凋亡因子Caspase-9、RBM10、CD44、抑制凋亡因子BCL-2、以及与参与细胞活性、分化黏附、迁移的因子17α羟化酶、eNOS和LHR在生姜粉作用镉诱导损伤后进行检测,TUNEL实验检测DNA凋亡情况,最后行统计学分析得出实验数据。结果:首先,基于不同浓度的镉对小鼠睾丸进行诱导损伤,运用MTT比色法筛选最佳损伤作用时间(12h),利用免疫印迹的方法检测蛋白的表达,结果显示抑凋亡因子Bcl-2和促凋亡因子Caspase-9、CD44分别表达出递增和递减的趋势(P<0.05)预实验的结果中筛选出了镉诱导损伤的终浓度为10μmol/L、作用时间为12个小时,再加入生姜粉干预12个小时,根据HE染色观察睾丸组织的病理学改变、TUNEL法检测DNA凋亡、免疫组化法中对细胞活性的因子(17α羟化酶、eNOS、LHR)的检测、对细胞增殖、凋亡相关因子(RBM10、Caspase-9)的检测中,我们得出随着生姜粉浓度的升高而出现浓度依赖效应,与对照组相比较,差异显著(P<0.05)。实验结果证实了生姜对于镉致睾丸损伤起到了一定作用的修复机制。结论:从形态学HE染色、TUNEL法检测DNA凋亡实验和各种酶的表达中,证明NO的活性与生姜粉的修复作用相关。NO在生姜粉对镉致睾丸间质细胞损伤中参与了细胞的凋亡或增殖活动,并起了关键性作用。通过本实验的体内和体外实验的双重验证;生姜粉对镉致睾丸损伤有保护作用,并且随生姜浓度趋势变化而变化。认为在生姜的保护作用过程中,生姜在本实验的中浓度和高浓度的范畴内有一个最合适的浓度值,即能促进损伤细胞的修复。
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