【摘 要】
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研究目的:观察香烟烟雾能否引起大鼠肺组织的氧化应激和凋亡及探讨N-乙酰半胱氨酸可能的保护作用和相关分子机制。研究方法:1.SPF级Wistar雄性健康大鼠32只,随机分成4组,分别为对照组（Control组）,N-乙酰半胱氨酸组（NAC组）,香烟烟雾暴露组（CS组）,香烟烟雾暴露加N-乙酰半胱氨酸组（CS+NAC组）。将CS组与CS+NAC组大鼠暴露于香烟烟雾:10支香烟/次,2次/天,两次熏烟间
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研究目的:观察香烟烟雾能否引起大鼠肺组织的氧化应激和凋亡及探讨N-乙酰半胱氨酸可能的保护作用和相关分子机制。研究方法:1.SPF级Wistar雄性健康大鼠32只,随机分成4组,分别为对照组（Control组）,N-乙酰半胱氨酸组（NAC组）,香烟烟雾暴露组（CS组）,香烟烟雾暴露加N-乙酰半胱氨酸组（CS+NAC组）。将CS组与CS+NAC组大鼠暴露于香烟烟雾:10支香烟/次,2次/天,两次熏烟间隔4-6 h,每周5天,共4周。于每天熏烟前2 h给予NAC组和CS+NAC组大鼠NAC(150 mg·kg-1·d-1)灌胃处理。4周后,腹腔注射1%戊巴比妥钠(40 mg·kg-1)麻醉大鼠,采集心脏血液,置于室温2h,离心获取血清;取部分肺组织迅速冷冻于液氮,部分肺组织4%多聚甲醛固定。2.ELISA法测定血清丙二醛（Malondialdehyde,MDA）及超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）水平。3.Western blot检测Bax,Bcl-2,Keap1,Nrf2,HO-1蛋白的表达。4.HE染色观察CS与NAC对肺组织形态的影响。5.免疫组化检测8-羟基脱氧鸟甘（8-hydroxydeoxyguanosine,8-OHd G）,Caspase3 p12蛋白在肺组织中的表达。6.免疫荧光双标记法检测8-Ohd G及Caspase3 p12与肺泡‖型上皮细胞特异性标记蛋白SP-C是否有共定位。研究结果:1.NAC可以改善CS导致的大鼠体重增长缓慢。对大鼠每阶段体重进行统计学分析后发现,NAC组与Control组相比,体重增长无明显差异（P>0.05）;CS组和Control组比较,体重增长明显减慢（P<0.05）;CS+NAC组与CS组比较,体重增长幅度有所回升,并从第二周末开始具有统计学意义（P<0.05）。2.NAC可以改善CS导致的肺组织形态的改变。HE结果显示,CS组肺泡腔略扩张,融合,大小不一,肺泡腔内出现水肿液,间质水肿,炎细胞浸润。CS+NAC组和CS组比较,肺泡腔扩张及间质水肿减轻,炎细胞浸润减少。3.NAC可以改善CS诱导的氧化应激。ELISA法检测大鼠血清SOD和MDA浓度结果显示:和Control组比较,CS组MDA浓度明显升高（P<0.05）,SOD浓度明显降低（P<0.05）;CS+NAC组MDA浓度较CS组明显降低（P<0.05）,SOD浓度明显升高（P<0.05）。此外,免疫组化染色结果表明,8-OHd G表达主要在胞核,少部分在胞浆。与Control组相比,CS组8-OHd G表达增强;CS+NAC组与CS组相比,8-OHd G表达强度下调。4.NAC可以改善CS诱导的细胞凋亡。Western blot检测结果表明,CS组和Control组相比,Bax蛋白表达增加,但无统计学意义（P>0.05）,Bcl2蛋白表达显著减少（P<0.05）;CS+NAC组与CS组相比,Bax蛋白表达显著降低（P<0.05）,Bcl2蛋白表达显著增加（P<0.05）。此外,免疫组化染色结果表明,Caspase3 p12表达主要在胞质,少部分在胞核。与Control组相比,CS组Caspase3p12蛋白活化表达增强;CS+NAC组与CS组相比,Caspase3 p12蛋白活化表达强度下调。5.CS刺激下,肺泡Ⅱ型上皮细胞发生了氧化应激和凋亡。免疫荧光结果显示:8-OHd G及Caspase3 p12与SP-C存在共定位。6.NAC对CS诱导的氧化应激和凋亡的拮抗作用可能与Nrf2/HO-1有关。Western blot检测结果表明,CS组和Control组相比,Nrf2,HO-1蛋白表达显著减少（P<0.05）,Keap1蛋白表达减少但差异不具有统计学意义（P>0.05）;CS+NAC组与CS组相比,Nrf2,HO-1蛋白表达显著增加（P<0.05）;Keap1蛋白表达增加但差异不具有统计学意义（P>0.05）。研究结论:1.CS可以引起全身（血清）和局部（肺组织）的氧化应激,导致肺组织中细胞凋亡增加。2.NAC可以改善CS诱导的氧化应激并减轻细胞凋亡。3.NAC对CS诱导的氧化应激和凋亡的拮抗作用可能与Nrf2/HO-1有关。
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