精子和卵子的成功受精是动物繁衍后代的基础,精子能否运动到受精部位,直接决定着精子和卵细胞受精的成败。精子运动能力对动物繁殖十分重要,学者也对精子活力做了不少研究,发现一些与精子活力相关的基因、蛋白,但目前对于湖羊精子的研究较少。本研究利用mini-Percoll密度梯度离心法分离湖羊鲜精,获得高活力组精子和低活力组精子。通过基于TMT技术的蛋白质组学方法对湖羊高活力组和低活力组精子的差异蛋白组进行分析,以期发现关于湖羊精子活力的生物标志物,并为进一步探究精子运动的分子机制提供参考意见。具体结果如下:1)本研究利用mini-Percoll密度梯度离心法成功分离湖羊鲜精,获得高活力组运动精子比例为75.7%,前向性运动精子比例为36.0%;低活力组运动精子比例为28.0%,前向性运动精子比例为1.7%。高活力组精子和低活力组精子的运动精子比例、前向性运动精子比例差异极显著。2)本研究共鉴定出1727个蛋白质,其中1554个蛋白质被定量,发现5种蛋白质在湖羊高活力组精子中上调,92种蛋白质在湖羊高活力组精子中下调,其中在湖羊高活力组上调的蛋白为:PEBP4、SPATA18、GPD1、CPVL、FAM161A。3)通过对湖羊高活力组精子和低活力组精子的差异蛋白组的GO分析发现,在生物学途径上,差异蛋白质主要参与蛋白质折叠过程、细胞氧化还原平衡过程、精子发育过程、mRNA剪接过程等。在细胞组成上,差异蛋白质主要位于胞外体、细胞膜、核质等。在分子功能上,差异蛋白最丰富的功能是poly(A)RNA结合活性、核苷酸结合活性、mRNA结合活性、翻译延伸因子活性等。4)通过对湖羊高活力组精子和低活力组精子的差异蛋白组的KEGG分析发现,差异表达的蛋白质主要参与剪接体通路,内质网蛋白质加工通路,核糖体通路等。本研究对湖羊高活力组精子和低活力组精子的差异蛋白组进行了分析,研究结果为发现湖羊精子活力的生物标志物和探究精子运动的分子机制提供参考意见。