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目的通过研究正常浆细胞和恶性浆细胞中Blimp1基因与内质网应激诱导的ATF4/CHOP细胞凋亡通路的关系,探讨Blimp1在多发性骨髓瘤细胞中的抗凋亡机制;通过阿司匹林体外刺激U266细胞,探讨阿司匹林抗骨髓瘤细胞的机制。方法(1)收集40例初诊的未经治疗的多发性骨髓瘤患者和30例骨髓相对正常者(骨髓细胞形态学显示为正常或特发性血小板减少性紫癜或缺铁性贫血的患者)的骨髓液,采用免疫磁珠法分选CD138+的浆细胞,实时荧光定量PCR方法检测细胞中Blimp1,ATF4和CHOP m RNA表达水平。(2)将U266骨髓瘤细胞分为空白对照组,阴性对照组(阴性对照载体)和阳性实验组(LV-Blimp1-RNAi(40051-2)),转染72h后,荧光定量PCR检测各组细胞中Blimp1,ATF4和CHOP m RNA的表达水平。(3)在96孔培养板中,用不同浓度的阿司匹林溶液(0,0.5,2.5,5.0mmol/L)体外刺激U266细胞,分别于刺激24h、48h、72h,用CCK-8方法检测阿司匹林对细胞的增殖活性的抑制作用。(4)在6孔培养板中,用不同浓度的阿司匹林溶液(0,0.5,2.5,5.0mmol/L)体外刺激U266细胞,刺激72h后,收集细胞,荧光定量PCR检测各组细胞中Blimp1,ATF4和CHOP m RNA的表达水平。使用SPSS 17.0和Graph Pad Prism 5软件对所得数据进行统计和分析,所有资料数据均符合正态分布,用均数±标准差表示。两独立样本均数的比较采用独立样本t检验,多组定量资料均数的比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用Bonferroni检验。α=0.05作为显性检验水准。结果1 Blimp1,ATF4和CHOP在正常浆细胞和恶性浆细胞中的表达水平:和正常浆细胞比较,MM患者骨髓中分离的恶性浆细胞中Blimp1m RNA表达水平显著升高((1.106±0.161)vs(2.527±0.355),P<0.05),ATF4和CHOP m RNA表达水平显著降低((1.004±0.035)vs(0.753±0.108),P<0.05;(0.990±0.056)vs(0.813±0.073),P<0.05),差异均有统计学意义。2 LV-Blimp1-RNAi(40051-2)慢病毒表达载体感染U266细胞72h后,对细胞中Blimp1、ATF4和CHOPm RNA表达水平的影响:LV-Blimp1-RNAi(40051-2)慢病毒表达载体感染U266细胞的最适MOI值为100。在MOI=100的感染条件下,荧光倒置显微镜观察转染效率>80%。与空白对照组和阴性对照组比较,阳性实验组中Blimp1 m RNA的表达水平显著下调((1.006±0.071)vs(0.995±0.070)vs(0.653±0.089),F=60.09,P<0.001),ATF4和CHOP m RNA表达水平显著升高[((1.006±0.059)vs(0.989±0.046)vs(1.354±0.073),F=104.8,P<0.001);((1.006±0.067)vs(1.004±0.074)vs(1.585±0.106),F=149.8,P<0.001)],差异均有统计学意义。3不同浓度阿司匹林溶液对U266骨髓瘤细胞增殖活性的影响:CCK-8方法检测不同浓度阿司匹林刺激24h、48h、72h后,U266骨髓瘤细胞增殖活性的变化,结果显示在0.5-5mmol/L浓度范围内,阿司匹林可显著抑制U266骨髓瘤细胞的增殖活性,抑制作用随药物刺激时间的延长和刺激浓度的增加而增强。4不同浓度阿司匹林溶液对U266骨髓瘤细胞中Blimp1、ATF4和CHOPm RNA的表达水平的影响:不同浓度阿司匹林刺激72h后,U266细胞中Blimp1的表达水平随药物浓度升高而依次降低,而ATF4和CHOP的表达水平随药物浓度升高而依次升高。结论1.Blimp1可通过干扰ATF4/CHOP信号通路,抑制内质网应激诱导的骨髓瘤细胞的凋亡。2.阿司匹林可通过抑制Blimp1表达,促进ATF4、CHOP表达发挥抗骨髓瘤细胞的作用。