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目的 通过单因素考察和正交试验优化铁皮石斛多糖的提取工艺;利用DEAE-纤维素和Sephacryls-300柱层析分离纯化铁皮石斛多糖,并对分离出的组分进行结构分析。考察铁皮石斛多糖对急性酒精性肝损伤小鼠的防护作用,从而为铁皮石斛的综合开发利用提供实验数据。方法①首先以提取温度、提取时间、料液比和提取次数为因素,以铁皮石斛提取液中的糖含量为指标,通过单因素实验确定考察因素和水平,在此基础上设计L9(34)正交试验,优化铁皮石斛多糖的提取工艺。②新鲜的铁皮石斛洗净匀浆粉碎后,用正交工艺浸提,然后离心取上清、浓缩、脱蛋白、醇沉、取沉淀真空干燥即得到铁皮石斛多糖(DOP)。用硫酸苯酚法测定其多糖含量,硫酸咔唑法测定其糖醛酸含量,考马斯亮蓝测定蛋白含量。粗多糖先通过DEAE-纤维素柱,用Tris-cl缓冲液洗脱,再用NaCl溶液梯度洗脱,收集洗脱组分峰,浓缩后,经过Sephacryls-300进一步分离纯化,并对分离纯化得到的组分进行高效液相、红外分析。③取雄性ICR小鼠,随机分为空白对照组、模型对照组组、联苯双酯阳性药组、DOP(10、50、250 mg.kg-1)不同剂量组。建立小鼠急性酒精性肝损伤模型,并测定血清中 ALT、AST、TG、SOD、MDA 含量及肝匀浆中 ALT、AST、SOD、MDA 含量。通过RT-PCR检测肝脏ATGL、HO-1 mRNA的表达情况。结果①以水为溶剂,考察得到铁皮石斛多糖的最佳提取工艺为:提取温度70℃,提取时间4 h,料液比1:40,提取1次;各因素的影响顺序为:提取温度>提取时间>提取次数>料液比。②实验室提取得到的铁皮石斛多糖为深褐色固体,多糖含量为88.83%,糖醛酸含量为7.44%,可溶性蛋白含量为0.41%。石斛粗多糖经过DEAE-纤维素柱分离出3个组分峰,分别命名为DOP1、DOP2、DOP3;组分峰浓缩后过Sephacryls-300,分别分离出单峰、双峰和四峰,命名为 DOP1-1、DOP2-1、DOP2-2、DOP3-1、DOP3-2、DOP3-3、DOP3-4。经高效液相分析可知DOPl-1、DOP2-1含有甘露糖和葡萄糖,其中甘露糖占主要部分;DOP3-1、DOP3-2、DOP3-3含有葡萄糖。组分DOP2-2、DOP3-4未检测出峰。经红外分析可知多糖DOP1-1、DOP2-1、DOP3-1具有多糖类物质的一般特征。③与空白对照组相比,模型对照组小鼠ALT、AST含量显著升高(P<0.05),表明本实验急性酒精性肝损伤模型是成立的;与模型对照组相比,DOP各剂量组能降低ALT、AST、TG和MDA水平,能升高SOD含量;DOP剂量组ATGL和HO-1 mRNA的表达也有变化。结论 通过单因素考察和正交试验优化了铁皮石斛多糖的提取方法,并用DEAE-52纤维素柱和Sephacryls-300对铁皮石斛多糖进行了分离纯化,结果表明工艺简便可行,方法可靠。DOP可以通过降低由于一次性大量饮酒而升高的ALT、AST、TG及MDA水平,升高SOD水平,从而对小鼠急性酒精性肝损伤起到一定的预防保护作用,这可能与其上调肝脏中ATGL及HO-1 mRNA表达,从而加速TG分解并提高机体抗氧化能力有关。