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目的:白介素6(IL-6)在大肠癌的发生、发展中产生了重要作用。因此,本实验通过电转染白介素6基因来使大肠癌Lovo细胞中的白介素6过表达,探讨白介素6对大肠癌Lovo细胞增殖与凋亡的影响,用MTT法检测白介素6基因过表达Lovo细胞株对5氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)的敏感性。方法:实验分为3组:正常Lovo细胞组、空载质粒Lovo细胞组、过表达质粒Lovo细胞组。1)建立白介素6基因过表达Lovo细胞株:通过采用分子克隆技术将白介素6基因插入表达载体pECFPN1的克隆位点之间,获得重组质粒IL-6-pECFP-N1,通过DNA测序鉴定阳性质粒,以电穿孔转染法将重组质粒IL-6-pECFP-N1导入受体Lovo细胞中,获取白介素6基因过表达Lovo细胞株。2)用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测白介素6蛋白的含量来判断三组细胞白介素6的表达情况。3)转导Lovo细胞株细胞凋亡检测:用7-AAD/PE-Annexin V染色法流式细胞术检测12h、36h、72h三个时间点各细胞株的凋亡或存活情况。4)MTT检测不同浓度(20ug/ml、80ug/ml、160ug/ml、320ug/ml)的5-氟尿嘧啶处理各组细胞株后12h、36h、72h三个时间点的细胞增殖抑制情况。结果:1)测序结果显示成功构建了重组质粒il-6-pecfp-n1。2)酶联免疫吸附测定法(elisa)检测白介素6蛋白的含量:白介素6蛋白在三组细胞中都有不同水平的表达,在白介素6基因过表达lovo细胞株中表达水平最高,且含量明显高于正常lovo细胞组、空载质粒lovo细胞组(p<0.05),而正常lovo细胞组与空载质粒lovo细胞组白介素6的含量差别无统计学意义(p>0.05)。3)7-aad/pe-annexinv染色法流式细胞术检测结果表明白介素6基因过表达lovo细胞组细胞存活量明显高于正常lovo细胞组细胞存活量与空载质粒lovo细胞组细胞存活量,差异有统计学意义(p<0.05)。而正常lovo细胞组细胞存活量与空载质粒lovo细胞组细胞存活量差异无统计学意义(p>0.05)。4)mtt检测结果显示5-氟尿嘧啶对各组细胞增殖均有抑制作用,抑制率呈时间-浓度依赖性(p<0.05)。而三组间白介素6过表达lovo细胞组的增殖抑制率明显高于正常lovo细胞组与空载质粒lovo细胞组,差异具有统计学意义(p<0.05),正常lovo细胞组与空载质粒lovo细胞组的增殖抑制率无明显差异(p>0.05)。结论:1)成功构建了重组质粒il-6-pecfp-n1,通过电转染重组质粒成功获得了白介素6基因过表达lovo细胞株。2)大肠癌lovo细胞转染白介素6基因后,能够使白介素6获得相对高表达。3)白介素6基因过表达大肠癌lovo细胞株体外培养其凋亡率明显受到抑制,结果显示,白介素6对大肠癌lovo细胞的凋亡具有抑制作用。4)白介素6基因过表达大肠癌Lovo细胞株对5-氟尿嘧啶敏感,且随时间及浓度的增加,增殖受到明显抑制。