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肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Apo2L/TRAIL)是新近发现的TNF家族成员。这种蛋白质分子量为19kDa,由168个氨基酸组成。在体内外都能诱导多种肿瘤细胞凋亡而对正常组织没有明显副作用。通过对基因工程菌E.coliC600/pBV-TRAIL的表达优化,TRAIL蛋白的表达量在摇瓶培养中可达25~30%。同时考察了可溶性TRAIL蛋白表达的变化规律,通过降低诱导强度,延长诱导时间,可溶性TRAIL蛋白表达量从4.5%提高到13.1%。在高密度培养EscherichiacoliC600/pBV-TRAIL生产TRAIL蛋白中,对诱导前比生长速率、诱导期的碳源(甘油和葡萄糖)以及诱导期的流加策略进行了考察。结果发现,在高的诱导前比生长速率(μ=0.22h-1)下比低的诱导前比生长速率(μ=0.10h-1)下进行诱导更有利于TRAIL蛋白的表达,表达水平从5.1%提高到7.2%,TRAIL蛋白的产量从1.29gL-1提高到1.99gL-1。我们也发现,相比葡萄糖作为诱导碳源,甘油作为诱导期的碳源表达TRAIL蛋白,其产量提高了1.59倍。而在诱导期采用pH-stat流加策略TRAIL表达水平提高到16.1%,产量增长到4.51gL-1。
我们获得了一株具有良好抗噬菌体稳定性及较强表达TRAIL蛋白的基因工程菌抗性突变株R-4。在对突变株R-4进行高密度培养研究中,菌体浓度达到51.9DCWgL-1,TRAIL蛋白表达水平为14.2%,产量达到3.80gL-1。因为突变株具有良好的抗噬菌体稳定性及较强地表达TRAIL蛋白的能力,突变株R-4能够应用到工业发酵生产中。