牛传染性鼻气管炎（Infectious bovine rhinotracheitis,IBR）是由牛传染性鼻气管炎病毒（Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV）引起的,主要表现为高热、流产死胎和神经系统病变等症状,是呼吸道疾病综合症的主要病原之一,严重可导致动物死亡,给养殖业带来巨大的经济损失。线粒体的正常形态功能很容易受外界病原体的危害,而病毒感染就是引起线粒体损伤的重要因素之一。Micro RNA（miRNA）是由21～25个碱基组成的小RNA,通过调控靶基因影响细胞的多种生理机制。近年来有研究证实,IBRV感染牛肾细胞（Madin darby bovine kidney Cells,MDBK）可通过诱导线粒体功能障碍致细胞凋亡,但对miRNA是否参与IBRV诱导MDBK细胞线粒体损伤过程及相关机制尚未见报道。本研究通过建立IBRV诱导MDBK细胞线粒体损伤模型,应用高通量测序技术检测IBRV诱导MDBK细胞线粒体损伤过程中miRNA表达谱的变化情况;利用实时荧光定量PCR（Quantitative real-time PCR,q RT-PCR）、流式细胞术、透射电镜等技术研究miRNA在IBRV诱导MDBK细胞线粒体损伤过程中的调控作用。主要研究结果如下:1.采用流式细胞术检测不同浓度IBRV感染MDBK细胞不同时间后线粒体膜电位（Mitochondrial membrane potential,MMP）及线粒体膜通透转换孔（Mitochondrial permeability transition pore,m PTP）异常开放情况。结果显示1.5 MOI为IBRV诱导MDBK细胞线粒体损伤最佳浓度;6～24 h为IBRV诱导MDBK细胞线粒体损伤最适时间;进一步采用透射电镜技术观察1.5 MOI IBRV感染MDBK细胞6 h和24 h后线粒体损伤情况,结果显示在6 h线粒体出现肿胀,破裂,部分嵴断裂消失;24 h线粒体肿胀更加明显,线粒体嵴完全断裂,呈现空泡状。2.采用高通量测序技术检测IBRV诱导MDBK细胞线粒体损伤过程中miRNA表达谱的变化情况,根据6 h和24 h与对照组相比有显著差异（P＜0.05）的条件筛选得到279个miRNA,其中exist miRNA有104个,know miRNA有133个,novel miRNA有42个,且125个miRNA上调,154个miRNA下调。选取exist miRNA和know miRNA进行GO富集分析,得到与线粒体相关的靶基因共920个,对应197个miRNA。按照Count数＞5 000的条件进一步筛选出11个差异表达的miRNA,其中exist miRNA有8个,know miRNA有3个。采用q RT-PCR技术对筛选出的11个miRNA进行验证,其中miR-10a、miR-10b、miR-182、miR-31、miR-21-x、miR-92-y、miR-342和miR-4454-z与高通量测序结果一致。根据q RT-PCR验证结果及与线粒体相关靶基因筛选结果选择miR-10a、miR-182作进一步研究。3.将miR-10a、miR-182 mimics和inhibitor分别转染至MDBK细胞,接种IBRV,24 h后检测MMP和m PTP异常开放情况,结果显示,miR-10a和miR-182均显著促进IBRV诱导MDBK细胞m PTP异常开放和MMP去极化（P＜0.05）。本研究成功建立了IBRV诱导MDBK细胞线粒体损伤模型,证实IBRV诱导MDBK细胞线粒体损伤过程中miRNA表达谱发生变化,获得与线粒体相关的miRNA及靶基因,并且发现miR-10a、miR-182可促进IBRV诱导MDBK细胞线粒体损伤过程。本研究为后续IBR防治及相关药物的研发奠定了理论基础与实验数据支撑。